[发明专利]一种十七肽的医药用途

说明书

本发明涉及一种十七肽的医药用途，特别是涉及该十七肽用于治疗神经元退行性变的新用途。

所述十七肽是体内存在的称为β-淀粉样肽前体蛋白肽链中第319-335位的肽段，由17个氨基酸组成，其序列是丙氨酸-赖氨酸-谷氨酸-精氨酸-亮氨酸-谷氨酸-丙氨酸-赖氨酸-组氨酸-精氨酸-谷氨酸-精氨酸-蛋氨酸-丝氨酸-谷氨酰胺-缬氨酸-蛋氨酸。(AKERLEAKHRERMSQVM)。国外在90年代中期发现APP17肽具有神经营养作用，包括：促进轴突生长、增加突触密度、能保护缺血引起的神经元损伤，但未见有关APP17肽治疗神经元退行性变的报道。

神经元退行性变包括一类原因不明的疾病，如老年性痴呆、帕金森氏病、运动元疾病和其它一些疾病。另一类为病因较明确的疾病引起神经元退变，如糖尿病和脑血管疾病。但无论病因明确与否，目前的临床上无针对神经元退行性变的药物。例如对老年性痴呆应用胆碱酯酶抑制剂，帕金森氏病给以多巴胺等或控制原发病变(控制糖尿病和改善供血)为主要手段，因此现有的药物不能真正有助于神经元退行性变的恢复。当前，国际上研究治疗神经元退行性变，主要着眼于神经生长因子和神经营养因子的开发，应用一些研究表明这些因子可能对外周神经病变有一定效果，但因不能通过血脑屏障而对中枢神经退行性变缺乏治疗效果。

本发明是目的是要开发一种新的治疗神经元退行性变的药物。近年来我们对APP17肽进行了进一步的研究。我们的研究证实APP17肽在体外能增加神经母细胞瘤细胞胞体面积和轴突生长的长度。我们研究工作主要应用三种神经元退行性变的模型(糖尿病小鼠、去卵巢大鼠和半乳糖老化小鼠)，观察模型动物的行为学(水迷宫)、海马神经元超微结构和30多种与神经元退行性变有关的蛋白质的表达。研究表明这些动物模型存在海马神经元的退行性改变，表现为学习记忆障碍、神经元超微结构异常，蛋白质表达异常为tau蛋白过度磷酸化、Aβ增加、多种神经营养因子减少。APP17肽对这些改变具有明显的预防和治疗作用，无论在造模同时给药(皮下注射)或造模后若干星期给药均有同样效果。APP17肽对糖尿病外外周神经病变同样具有明显作用，在体外实验中，APP17肽可促进神经营养因子-3、神经丝蛋白和胰岛素降解酶的表达，并能使基因转染细胞Aβ的分泌减少。APP17肽还有保护谷氨酸和高糖对神经元的损伤作用。由于APP17肽分子量小，皮下给药能明显改善海马神经元退行性变。因而我们发现了APP17肽能治疗人神经元退行性疾病的新医药用途。

将APP17肽用于治疗神经元退行性疾病有如下优点：

1)它本身就是神经营养因子。

2)能使多种神经营养因子表达增加。

3)对不同病因(胰岛素和雌激素缺乏性神经系统病变、氧化应激神经元损伤)引起的神经元退变均有治疗作用，说明是一种“广谱”抗神经退变的多肽。

4)皮下注射能治疗脑神经元退行性变。

5)APP17肽是β-淀粉样肽前体蛋白N端中的一段17肽，所以它的序列存在于体内，而且分子量小(约1900)，不会引起过敏反应。

6)成本低、多肽质量有保证。

本发明APP17肽采用已知的肽合成方法固相合成法合成。固相肽合成的主要思想是：先将所要合成肽链的羧基末端氨基酸的羧基以共价键的结构同一个不溶性的高分子化合物(树脂)相连接，然后以此结合在固相载体上的氨基酸作为氨基组份，经过脱去氨基保护基并同过量的活化羧基组份反应，接长肽链。这样的步骤可以反复地多次进行下去，最后达到所需要合成的肽链的长度。下式表示了这个合成过程。

原料：

HMP resin(p-羟甲基苯氧甲基多聚乙烯树脂)

Fmoc-AA(9-芴基甲氧羰酰基保护的氨基酸)

NMP氮甲基吡咯烷

DCM二氯甲烷

甲醇

哌啶

DMAP二甲基氨基吡啶

HOBt羟基苯并三唑

DCC二环已基碳二亚胺

TFA三氟乙酸

EDT1,2-乙二硫醇

硫代苯甲醚

结晶苯酚

乙腈仪器：

多肽自动合成仪(美国ABI431A型)

旋转蒸发仪(日本Yamato,RE50)

高效液相色谱仪(美国PE151A型)

冷冻干燥机合成方法：

称取HMP树脂100mg，取代当量是1.0meq，即0.1mmol于美国ABI431A型多肽自动合成仪的反应腔内，由合成仪自动将特定的AA按不同的顺序连接起来，偶联率达99％反应如下：