[发明专利]检测与酿造有关的微生物的方法和可用于此方法的核酸分子

权利要求书

1.检测样品中与酿造有关的微生物的方法。该方法包括下列步骤：

(a)将样品与至少包括两个一级核酸分子(引物)的组合接触。

此核酸分子与和酿造有关的微生物核酸的一个保守区域杂交；

(b)扩增微生物核酸分子或其一部分，以产生至少一个扩增片段；

(c)将在步骤(b)中获得的扩增片段与至少一个二级的核酸分子(探针)接触，上述二级核酸分子与至少一个扩增片段进行杂交，这个扩增片段包括一个对于所有与酿造有关的微生物的，或对于一个或多个与酿造有关的微生物的科、属、种的微生物核苷酸的特异的片段；

(d)鉴别至少一个由扩增片段和从c)中得出的二级核酸分子共同构成的杂交核酸分子。

2.根据上述权利要求之一所述的检测方法，其特征在于是包括PCR扩增步骤的方法。

3.根据上述权利要求之一所述的检测方法，其特征在于是又包括连接酶链反应的方法。

4.根据上述权利要求之一所述的检测方法，其特征在于是又包括等温核酸扩增反应的方法。

5.根据上述权利要求1到4之一所述的检测方法，其特征在于是又对二级核酸分子进行修饰和标记的方法；此修饰和标记可选用以下物质完成：(i)放射性物质，(ii)染料，(iii)荧光物质(iv)能够固定在固定项上的物质和(v)可以与核苷酸分子直接或间接地，特别是借助抗体，抗原，酶和/或与酶亲和的物质或酶合物进行反应的物质。

6.根据上述权利要求之一所述的检测方法，其特征在于其中一级和/或二级核酸分子的长度至少为10个，最好为15-30碱基。

7.根据上述权利要求之一所述的检测方法，其特征在于是对其中的一级和/或二级核酸分子进行过修饰的方法；此修饰是将10个相连的核苷酸中的至多20％，特别是10er片段中的1或2个核苷酸，通过细菌中非天然存在的核苷酸替代。

8.根据上述权利要求之一所述的检测方法，其特征在于保守区域存在于含有细菌的23S和5S基因的基因片段的方法。

9.作为探针和/或引物检测与酿造有关的微生物的核酸分子，其选取范围如下：

(i)包含SEQ ID NO 1-107的一个序列，或此序列中一长度为10个，最好是15到30个碱基的片段的核酸分子；

(ii)与一个(i)中核酸分子发生特异性杂交的核酸分子；

(iii)与一个(i)或(ii)中的核酸分子具有70％，最好至少90％的相同性的核酸分子；

(iv)与一个(i)到(iii)中的核酸分子互补的核酸分子。

10.根据权利要求9所述的核酸分子，其特征在于是DNA或RNA的核酸分子。

11.根据权利要求9所述的核酸分子，其特征在于是PNA的核酸分子。

12.根据权利要求9至11所述的核酸分子，其特征在于其中10个相连的核苷酸中的至多20％，特别是10er片段中的1或2个核苷酸，被细菌中非天然存在的核苷酸替代。

13.至少包括两个核酸分子的组合，该组合从以下选出：

(1)由至少两个权利要求9到12中所述的核酸分子组成的组合；

(2)由至少一个带有SEQ ID-No.40到47序列之一的核酸分子，与另一个至少带有SEQ ID-No.48-54中或SEQID-No.55-59或SEQ ID-No.60-72序列之一的核酸分子的组合。

14.含有一个权利要求9到12中所述核苷酸分子和/或一个 13中的核酸分子组合的试剂盒。

15.根据权利要求1到8中所述的方法，其特征在于此方法中的步骤(a)中使用了至少两个按照权利要求13得出的核酸分子的组合。

16.根据权利要求1到8及权利要求15中所述的方法，其特征在于此方法中使用至少一个由权利要求9到12中得出的核酸分子作为二级核酸分子(探针)。

17.根据权利要求16中所述的方法，其特征在于此方法中使用至少一个带有SEQ ID No.35-39或98-107序列之一的核酸分子作为二级核酸分子(探针)。