[发明专利]猪传染性胃肠炎病毒卵黄抗体和抗原及其制备

说明书

技术领域

本发明涉及一种猪传染性胃肠炎病毒的抗体和抗原及其制备方法。

背景技术

猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus，TGEV)为冠状病毒科、冠状病毒属的成员。TGEV病毒可感染所有年龄的猪，尤其是引起两周龄以下仔猪呕吐、严重腹泻和高死亡率(通常100％)，是目前在世界范围内广泛存在的一种猪高度接触性烈性肠道传染病，常常在猪场反复发生和流行，给养猪业带来极大危害。(PensaertM B.Disease of Swine.Seventh edition.Iowa State University Press.USA.1992，305-338)。

目前对该病的防治尚无特别有效的手段。可行的治疗方法仅是对症治疗，减少饥饿、脱水和酸中毒。关于TGEV的免疫预防报道较多，既有使用TGEV强毒或弱毒的主动免疫，也有饲喂含TGEV抗体乳汁的被动免疫(Porter P.，Allen W.D.Classes of immunoglobulinsrelated to immunity in the pig：A review.J.AM.Vet.Med.Assoc.1972，160：511-518)，还有新型亚单位疫苗、重组活载体疫苗等。鉴于TGEV在肠道内吸附和增殖，猪传染性胃肠炎发生与否与肠道局部免疫水平的高低密切相关，因而肠道的局部免疫对防治TGEV尤为重要，分泌型IgA水平的高低往往反映免疫的效果，目前使用的TGEV疫苗免疫猪体后血清抗体水平可能很高，而肠道局部免疫水平较差，不能达到阻止TGEV感染的目的。而乳汁免疫虽能保护初生仔猪抵抗TGEV的感染，但断乳后即失去保护力。

卵黄抗体可抵抗幼龄动物的胃酸屏障，抵抗肠道中胰蛋白酶和凝乳蛋白酶的消化。该种抗体效价维持时间长，化学性质稳定，可耐热、酸、碱，4℃可长时间存放。卵黄抗体还具有制备过程较血清抗体简单、省时省力、产量高、成本低、易于获得和提纯等许多优点。病毒免疫原免疫鸡体后通常在卵黄内产生高效价的抗体，而免疫家兔等用于制备血清抗体通常抗体效价高，收获血清抗体量较少，成本较高。(Ntakarutimana V.，DemedtsP.，Sande M.V.et al：A simple and economical strategy for downstream processing of specificantibodies to human transferring from egg yolk.J.Immun.Meth.1992，153：133-140。BizhanovG.，Vyshniauskis G：A comparison of three methods for extracting IgY from the egg yolk of hensimmunized with Sendai virus.Vet.Res.Comm.2000，24：103-113。罗函禄：高免卵黄抗体的应用及其展望.江苏农业科学.1997，5：59-63)。但猪传染性胃肠炎病毒卵黄抗体尚未见报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是研制一种抗TGEV卵黄抗体，该抗体经口服后可直接作用于动物的肠道，从而达到阻止TGEV在肠道吸附和增殖的目的。

本发明的技术方案是将猪传染性胃肠炎病毒经猪体内复壮后在猪睾丸细胞上增殖，用于制备免疫原，免疫非免疫蛋鸡，收集卵黄进行卵黄抗体效价检测，选择高效价的卵黄提纯卵黄抗体。该抗体经口服后直接作用于仔猪肠道，以治疗和预防TGEV感染。

具体方法为：

一.TGEV抗原制备：

1.仔猪哺育与攻毒

给1日龄未吃初乳仔猪口服TGEV病毒液，48小时后捕杀仔猪，取出全部小肠组织，用于提取和纯化TGEV。

2.TGEV提取与纯化

将小肠组织剪碎后充分研磨，加0.01MPBS(pH7.5)稀释，反复冻融，离心，取上清液加入6％PEG-6000和2％NaCl，放置后再离心，将沉淀重悬于PBS中，离心后取上清液进行超速离心。将沉淀重悬于PBS中，即为纯化病毒粒子。

3.TGEV在细胞上增殖