[发明专利]用于经皮给药的药物组合物

说明书

技术领域

本发明是关于一种含有甲氨蝶呤和蛋白转导结构域(PTD)的缀合物的 新型药物组合物。

背景技术

一般地，普遍知道甲氨蝶呤(Methotrexate)能够抑制细胞中DNA合成 所需叶酸的新陈代谢以及细胞的生长和分裂。特别地，甲氨蝶呤抑制有关叶 酸新陈代谢的酶中的一种—二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase，DHFR) 的酶活性。因而，甲氨蝶呤是通过抑制细胞增殖而可用于各种疾病的药物， 并显示给药后约2周内减轻疾病症状的非常快速的效果。所述抑制细胞增殖 对各种自身免疫病如类风湿性关节炎和牛皮癣非常有效。然而，因为已经连 续报道的各种副作用如引起严重肝毒性、胃肠紊乱以及肾和造血器官的损 伤，因而甲氨蝶呤很难长期使用。而且，甲氨蝶呤主要制成用于口服或注射 给药的剂型，但甲氨蝶呤的口服给药存在明显不便，例如以每次2.5毫克的 给药剂量，12小时间隔，每周3次给予活性药物。因为这个原因，一直需要 开发一种能够提高甲氨蝶呤药物给药效率以减少该药的给药剂量从而减少 副作用以及能够消除注射和口服给药不便的新型的药物给药方法。

同时，蛋白转导结构域(protein transduction domain，PTD)是用于将生 理活性分子渗透到宿主细胞的低分子量肽。首次报道的PTD是1998年在 HIV病毒的表面蛋白中发现的TAT。据报道，TAT PTD能够在短时间内有效 将分子量大于120千道尔顿的大型蛋白质传送给细胞。此后，发现了具有与 TAT PTD类似功能的不同氨基酸序列的多种PTD蛋白质，并提议使用这些 肽进行新型药物开发研究和药物传输系统(Drug Delivery System，DDS)研 究。因此，在医药和制药领域中领先的国家进行了各种努力，试图发现新型 PTD和使用PTD开发新型药物。本发明的发明人也进行了开发PTD的研究， 结果，开发出了显示比以前报道的PTD具有明显更高效率的将大分子(如 蛋白质)传递到体内及体外的细胞内的新型PTD(参见PCT/KR2003/000121 和PCT/KR2003/000122)。

发明内容

因而，本发明的发明人制备了用于甲氨蝶呤有效局部给药的PTD和甲 氨蝶呤的缀合物，以及将用于经皮给药的含有该缀合物的新型药物组合物用 于皮肤，并观察了结果。结果，我们惊奇地发现，甲氨蝶呤通过表皮传递到 身体损害位点，以显示药理效果，从而完成了本发明。

本发明的目的是提供一种含有甲氨蝶呤和蛋白转导结构域(PTD)的缀 合物的新型药物组合物。

本发明的另一个目的是提供一种通过经皮给药局部给予甲氨蝶呤的方 法。

附图说明

图1示出了通过肽键连接的MTX(甲氨蝶呤)和PTD(蛋白转导结构 域)的缀合物(MTX-PTD)的制备；

图2示出了根据本发明的MTX-PTD缀合物的高效液相色谱 (High-performance Liquid Chromatography，HPLC)分析结果；

图3和4为示出用于本发明的PTD经皮给药的共焦显微照片；

图5为示出了根据本发明的MTX-PTD缀合物的细胞增殖-抑制效果的 图表；

图6为示出了通过使用本发明的MTX-PTD缀合物进行治疗引起的关节 炎指数变化的图表；

图7为示出了使用本发明的MTX-PTD缀合物治疗后血液中IL-4和 IFN-γ水平的图表；

图8为示出了使用本发明的MTX-PTD缀合物治疗后血液中IL-6和 TFN-α水平的图表；

图9为示出了使用本发明的MTX-PTD缀合物治疗后血液中类风湿性关 节炎(RA)因子水平的图表；

图10为示出了使用本发明的MTX-PTD缀合物治疗后炎症组织的照片；

图11为示出了在具有TPA诱导炎症的动物模型中MTX-PTD缀合物肿 胀抑制效果的示意图。

具体实施方式

为实现上述目的，本发明提供了一种由式I表示的肽PTD(蛋白转导结 构域)和甲氨蝶呤(MTX)的缀合物。本发明的缀合物可以通过固相合成法 合成PTD、然后将MTX的-COOH基团通过肽键连接到合成的PTD的N- 端而制得(参见图1)。

[式I]