[发明专利]构建具有美伐他汀羟化能力的菌株的方法

权利要求书

1.一种核酸分子，所述核酸分子包含SEQ ID NO：1的核苷酸序列。

2.权利要求1的核酸分子，所述核酸分子与SEQ ID NO：1具有至少85％的序列同源性。

3.权利要求1的核酸分子，所述核酸分子与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同源性。

4.权利要求1的核酸分子，所述核酸分子与SEQ ID NO：1具有至少95％的序列同源性。

5.核酸分子，所述核酸分子为权利要求1-4中任一项的核酸分子编码或对其起反义核酸分子作用。

6.核酸分子，所述核酸分子与权利要求1-4中任一项的核苷酸序列杂交。

7.一种载体，所述载体包含权利要求1-4中任一项的多核苷酸。

8.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求7的载体。

9.一种制备多肽的方法，所述方法包括：在体外条件下培养权利要求8的宿主细胞，其中表达所述核酸分子编码的蛋白质；和从培养物中回收所述蛋白质。

10.一种多肽分子，所述多肽分子与SEQ.ID NO.1的氨基酸序列具有至少85％的序列同源性。

11.一种多肽分子，所述多肽分子与SEQ.ID NO.1的氨基酸序列具有至少90％的序列同源性。

12.一种多肽分子，所述多肽分子与SEQ.ID NO.1的氨基酸序列具有至少95％的序列同源性。

13.一种构建基因修饰菌株的方法，所述方法通过用含有启动子DNA序列、细胞色素P-450编码基因和fdxshe编码基因的质粒构建体转化宿主，使所述基因修饰菌株具有使美伐他汀羟化的能力。

14.权利要求13的方法，其中所述宿主选自原核生物宿主和真核生物宿主。

15.权利要求14的方法，其中所述原核生物为放线菌。

16.权利要求15的方法，其中所述放线菌为链霉菌属(Streptomyces)。

17.权利要求16的方法，其中所述链霉菌属(Streptomyces)选自浅青紫链霉菌(S.lividans)、嗜碳链霉菌(S.carbophilus)和淡蜡黄链霉菌(S.helvaticus)。

18.权利要求14的方法，其中所述原核生物宿主选自大肠埃希氏菌(Escherichia coli)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

19.权利要求14的方法，其中所述真核生物宿主为真菌。

20.权利要求19的方法，其中所述真菌为桔青霉(Penicilliumcitrinum)。

21.权利要求20的方法，其中所述桔青霉(Penicillium citrinum)宿主为产生ML-236B(美伐他汀)的菌株。

22.权利要求13的方法，其中所述质粒选自pWHM-3和pSCA。

23.权利要求13的方法，其中所述质粒为多拷贝质粒。

24.权利要求23的方法，其中所述多拷贝质粒为PIJ702。

25.权利要求13的方法，其中所述细胞色素P-450编码基因得自放线菌。

26.权利要求13的方法，其中所述细胞色素P-450编码基因得自链霉菌属(Streptomyces)。

27.权利要求26的方法，其中所述细胞色素P-450编码基因选自浅青紫链霉菌(S.lividans)、嗜碳链霉菌(S.carbophilus)和淡蜡黄链霉菌(S.helvaticus)。

28.权利要求27的方法，其中所述得自嗜碳链霉菌(S.carbophilus)的细胞色素P-450选自cytP-450sca-1、cytP450sca-2和cytP-450sca-3。

29.权利要求13的方法，其中所述启动子DNA序列与所述细胞色素P-450编码基因有效连接。