[发明专利]利用超滤进行病毒纯化

权利要求书

1.包含超滤步骤的病毒纯化方法，其中渗余物包含该病毒，所述方法的特征在于在渗透物侧施加至少5kPa的背压。

2.权利要求1的方法，其中在所述超滤步骤前，所述方法还包括以下步骤：

a)培养所述病毒感染的细胞，

b)向细胞培养物中添加核酸酶，然后，

c)任选将上述细胞裂解，提供包含该病毒的裂解液，

d)任选澄清该裂解液，优选通过深层过滤和随后的膜过滤来进行。

3.上述任何一项权利要求的方法，其中所述的超滤包括切向流过滤，优选采用中空纤维模块。

4.上述任何一项权利要求的方法，其中至少5kPa的背压是通过用泵将背压提供给渗透物来施加的。

5.上述任何一项权利要求的方法，其中的跨膜压力维持在低于20kPa。

6.上述任何一项权利要求的方法，其中所述的超滤包括用含有0.8M到2M的氯化钠或其它产生相等离子强度的盐的缓冲液对渗余物进行缓冲液置换，优选随后采用离子强度为包含少于0.5M NaCl的缓冲液的离子强度的缓冲液进行缓冲液置换。

7.上述任何一项权利要求的方法，其中所述的病毒为重组腺病毒。

8.权利要求7的方法，所述的方法不包括大小排阻层析步骤。

9.权利要求7或8的方法，所述方法不包括阴离子交换层析或阴离子交换过滤的步骤。

10.权利要求7-9中任何一项的方法，其特征为不包括层析步骤或离子交换过滤步骤。

11.权利要求7的方法，所述方法进一步包括用至少一个层析步骤对重组腺病毒进一步纯化的步骤。

12.权利要求11的方法，其中所述方法包括阴离子交换层析步骤，任选通过将包含病毒的溶液施加到含有带正电基团的带电过滤器上来进行。

13.权利要求11或12的方法，其中所述方法包括大小排阻层析步骤。

14.纯化重组腺病毒的方法，所述方法主要包括：

a)培养用所述重组腺病毒感染的细胞，

b)裂解所述的细胞，去除和/或片段化游离核酸，提供含有该重组腺病毒的裂解液，

c)澄清裂解液，得到腺病毒制备物，

d)对腺病毒制备物进行超滤，其中腺病毒制备物在渗余物中，从而浓缩所述腺病毒制备物，

e)对d)步骤的腺病毒制备物进行超滤，其中腺病毒制备物在渗余物中，并用至少5倍渗滤体积(DFVs)))的缓冲液对其进行置换，其中1DFV为d)步骤中的浓缩之后得到的渗余物体积，

f)优选对腺病毒制备物进行无菌过滤，

所述方法特征在于步骤d)和e)中在渗透物侧施加至少5kPa的背压。

15.纯化重组腺病毒的方法，所述方法主要包括：

a)培养用所述重组腺病毒感染的细胞，

b)裂解所述细胞，去除和/或片段化游离核酸，提供含有重组腺病毒的裂解液，

c)澄清裂解液，得到腺病毒制备物，

d)对c)步骤的腺病毒制备物进行超滤，其中腺病毒制备物在渗余物中，并用至少5倍渗滤体积(DFVs)的缓冲液对其进行置换，其中1 DFV为c)步骤之后腺病毒制备物的体积，

e)优选对腺病毒制备物进行无菌过滤，

所述方法特征在于步骤d)中在渗透物侧施加至少5kPa的背压。

16.权利要求14或15的方法，其中步骤b)包括：

b，i)添加核酸酶到细胞培养物中，然后，

b，ii)裂解所述细胞，提供含有重组腺病毒的裂解液。

17.权利要求14-16中任何一项的方法，其中的超滤包括切向流过滤，优选采用中空纤维模块来进行。

18.权利要求14-17中任何一项的方法，其中的背压是通过用泵将背压提供给渗透物来施加的。

19.权利要求14-18中任何一项的方法，其中超滤过程中的跨膜压力维持在20kPa以下。