[发明专利]胶囊青霉阿拉伯糖呋喃糖苷酶

说明书

发明领域

本发明涉及具有α-L-阿拉伯糖呋喃糖苷酶活性的分离的多肽和编码该多肽的分离的核酸序列。本发明还涉及包含所述核酸序列的核酸构建体、载体和宿主细胞，以及用于产生和使用所述多肽的方法。

发明背景

阿拉伯糖呋喃糖苷酶能水解α-L-阿拉伯糖苷中的末端非还原性α-L-阿拉伯糖呋喃糖苷残基，并被分类为EC 3.2.1.55。

Filho等(Appl.Environ.Microbiol.1996，Vol.62，168-173)公开了来自胶囊青霉(P.capsulatum)的两个α-L-阿拉伯糖呋喃糖苷酶的纯化和表征，所述两个α-L-阿拉伯糖呋喃糖苷酶的分子量分别为64.5kDa和62.7kDa。

来自黑曲霉的α-L-阿拉伯糖呋喃糖苷酶及其序列可从WO9606935得知。

发明简述

本发明人令人惊讶地从胶囊青霉菌株中分离出α-L-阿拉伯糖呋喃糖苷酶。所述α-L-阿拉伯糖呋喃糖苷酶的大小为大约35kDa。本发明的成熟氨基酸序列与WO9606935中的黑曲霉阿拉伯糖呋喃糖苷酶具有76％的同源性。本发明人还分离出编码所述新α-L-阿拉伯糖呋喃糖苷酶的基因。

因此，在本发明的第一方面提供阿拉伯糖呋喃糖苷酶，其为：a)多肽，该多肽具有如SEQ ID NO：2所示成熟肽的氨基酸序列，或者可通过一个或多个氨基酸的取代、缺失，和/或插入由其获得的多肽；b)(a)或(b)所述多肽的类似物，其：i)与所述多肽具有至少80％同源性，ii)是所述多肽的等位变体，c)由核酸序列编码的多肽，所述核酸序列在高严紧条件下与编码成熟多肽的SEQ ID NO：2的核酸序列的互补链或其具有至少100个核苷酸的亚序列杂交。

在第二方面，本发明提供核酸序列，所述核酸序列包含编码第一方面中阿拉伯糖呋喃糖苷酶的核酸序列。

在第三方面，本发明提供核酸序列，其包含：a)编码SEQ ID NO：2所示的阿拉伯糖呋喃糖苷酶的DNA序列，b)类似物DNA序列，其i)与所述DNA序列具有至少80％同源性，或者ii)在高严紧条件下与所述DNA序列的互补链，或其具有至少100个核苷酸的亚序列杂交，iii)是其等位变体，或者包含a)或b)的互补链。

在第四方面，本发明提供核酸序列，其与SEQ ID NO：1所示的DNA序列具有至少80％同源性，或者a)在高严紧条件下与所述DNA序列的互补链或其具有至少100个核苷酸的亚序列杂交，b)是其等位变体，或者是a)或b)的互补链。

在第五方面，本发明提供核酸构建体，其包含第二、第三和第四方面的核酸序列，所述核酸序列与能指导阿拉伯糖呋喃糖苷酶在合适的表达宿主中表达的一个或多个控制序列可操作地连接。

在第六方面，本发明提供重组表达载体，其包含第五方面的核酸构建体。

在第七方面，本发明提供重组宿主细胞，其包含第六方面的核酸构建体。

在第八方面，本发明提供用于产生阿拉伯糖呋喃糖苷酶的方法，其包括在有益于阿拉伯糖呋喃糖苷酶产生的条件下培养第七方面的宿主细胞，和回收阿拉伯糖呋喃糖苷酶。

在第九方面，本发明提供第一方面的阿拉伯糖呋喃糖苷酶的用途。

发明详述

在本发明的第一个实施方案中，分离的多肽具有的氨基酸序列与SEQ IDNO：2的氨基酸1至328(即，成熟多肽)所示的氨基酸序列具有至少80％同一性。在本发明的令人感兴趣的实施方案中，所述多肽与SEQ ID NO：2的氨基酸1至328所示的氨基酸序列具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％，或者至少99％的同一性(下文中的“同源多肽”)。

在优选的实施方案中，同源多肽具有的氨基酸序列与SEQ ID NO：2的氨基酸1至328所示的氨基酸序列相差5个氨基酸，例如4个氨基酸，如3个氨基酸，相差2个氨基酸，或相差1个氨基酸。