[发明专利]鹅去氧胆酸的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种纯化鹅去氧胆酸(3α，7α-二羟基-5β-胆酸)的方法。尤其，本发明涉及一种以高产率和高纯度、由猪胆汁固体中含有的低等级鹅去氧胆酸混合物纯化鹅去氧胆酸的方法。

背景技术

鹅去氧胆酸通常含在牛、猪、熊或家禽，例如鸡或鹅的胆汁中，也含在人的胆汁中。鹅去氧胆酸是制备熊去氧胆酸的原料，熊去氧胆酸能够有效缓解胆汁系统的疾病、高脂血症、胆石病和慢性肝病，本领域已知的制备熊去氧胆酸的常用方法如下所示。

制备鹅去氧胆酸的常用方法包括步骤：用甲基酯化胆酸(3α，7α，12α-三羟基胆酸)；用无水乙酸对3α和7α位上的羟基进行乙酰化作用以对其进行保护；使用铬酸将12α位上的羟基氧化为羰基，然后通过Wolff-kichner还原反应除去羰基；水解所得产物并脱保护以得到鹅去氧胆酸。上述方法需要将反应维持在高于200℃的温度下，而且原料的供应可能由于牛海绵状脑病等而被中断。

家禽的胆汁中含有鹅去氧胆酸、石胆酸和少量的胆酸。因此，从家禽制备鹅去氧胆酸的方法是本领域公知的，但是由于原料供应减少和产率低的原因这种方法在经济上并不可行[参见，Windhaus等人，IPhysiol.Chem.，140，177～185(1924)]。

美国专利No.4,186,143公开了一种从来自天然猪胆汁的鹅去氧胆酸混合物完全分离和纯化鹅去氧胆酸的方法。该方法包括以下主要步骤：通过胆汁的皂化作用而预处理除去3α-羟基-6-氧代-5β-胆酸；胆汁酸的酯化；胆汁酸酯的乙酰化；使用非极性有机溶剂除去中间产物；对式I的乙酰化的酯进行结晶；脱保护；和利用在有机溶剂中的结晶来制备式I化合物。但是，该专利没有描述用于式I的乙酰化酯的HPLC内容物，而且由于特有的旋光性为[α]_D²⁵+13.8°(c＝1，CHCl₃)，熔点为119～121℃[STD：[α]_D²⁵+15.2°(c＝1，CHCl₃)，熔点127～129℃]，因此终产物的纯度非常低。而且，经结晶纯化终产物需要非常长的时间(即，16-48小时)，并且整个过程有八个(8)步骤之复杂。因此，当使用上述方法纯化式I化合物时，终产物的产物变低，反应时间长达12天。因此，该方法经济上不可行。

尤其，当采用上述方法，由本发明中所用的含有5～35wt％鹅去氧胆酸的猪胆汁固体纯化式I的乙酰化酯时，尽管在乙醇溶剂中进行两次结晶，但是终产物的含量仍低达80％。

为了克服上述问题，本发明的目的是提供一种以高纯度和高产率纯化式I化合物的方法，同时还缩短整个方法所需的时间。

发明内容

本发明提供一种纯化式I化合物的方法，

[式I]

该方法包括下述步骤：预处理猪胆汁；胆汁酸的酯化；胆汁酸酯的乙酰化；使用非极性有机溶剂除去中间产物；乙酰化胆汁酸酯的结晶；和脱保护；其中该方法的特征在于

1)作为预处理步骤，将含有5～35wt％鹅去氧胆酸的猪胆汁固体溶解在含有盐的有机溶剂中；

2)作为结晶步骤，在0～15℃的温度范围内，使从预处理步骤获得的产物在甲醇或异丙醇中结晶；和

3)作为脱保护步骤，通过加入碱使从结晶步骤获得的产物脱保护，并通过加入酸使脱保护的产物在水存在下结晶。

发明详述

在本说明书中，措词“猪胆汁固体”代表来自猪胆汁的固体，其含有式I～IV的鹅去氧胆酸的混合物。

[式I]

[式II]

[式III]

[式IV]

其中，式I化合物代表鹅去氧胆酸(3α，7α-二羟基-5β-胆酸，CDCA)；式II化合物代表猪去氧胆酸(3α，6α-二羟基-5β-胆酸，HDCA)；式I化合物代表猪胆酸(3α，6α，7α-三羟基-5β-胆酸，HCA)；和式IV化合物代表3α-羟基-6-氧代-5β-胆酸(keto)。

下文中将举例详细说明根据本发明的纯化鹅去氧胆酸的每个步骤。

步骤1：猪胆汁固体的预处理