[发明专利]用于治疗慢性乙型肝炎的DNA疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于治疗慢性乙型肝炎病毒的DNA疫苗，以及制备该DNA 疫苗的方法。

背景技术

自从1966年第一次报道HBV(乙型肝炎病毒)，目前已知全世界超过3 亿人感染HBV，并且大约5千万人新近感染HBV。世界范围内慢性乙型肝炎感染 占肝癌患者的约80％，并且约75％的HBV病例被发现在亚洲国家。另外，HBV 感染导致每四人中的一人患有严重的肝病，包括肝癌和死亡。HBV感染了大约 5-8％的韩国人口。

在韩国，围产期间的母婴传播是HBV传播的主要来源。特别是，大约 90％的被感染婴儿将发展成慢性HBV感染。

目前临床批准用于治疗慢性乙型肝炎的药物包括拉米夫定(lamivudine) 以及α干扰素(IFN-α)。最近，阿德福韦(adefovir)和恩替卡韦(entecavir)已 经被(美国)食品药品管理局(FDA)批准用于治疗慢性HBV感染。拉米夫定(商 品名：Epivir-HBV；制造商：GlaxoSmithKline)是核苷类似物并且主要用于抑制 HBV聚合酶的活性。在治疗期间，拉米夫定有效抑制病毒复制。不过，停止治疗 后，大多数病人立即发生病毒反弹，导致肝损伤。拉米夫定的治疗有效性是暂时 的，并且低至约20％。另外，拉米夫定的长期有效性受限于拉米夫定治疗期间HBV 的YMDD突变体的出现，即，约24％在治疗一年后出现，约38％在治疗两年后出 现，约54％在治疗三年后出现，以及约66％在治疗四年后出现，如Leung NW等 人在Hepatology 2001，33：1527-1532的论文中所述。阿德福韦和恩替卡韦也作为 HBV聚合酶的竞争性抑制剂。尽管阿德福韦和恩替卡韦展示出与拉米夫定基本相 同的有效性水平，它们比拉米夫定具有小得多的抗药性HBV突变体的发生率，使 得就抗药性而言治疗相对于拉米夫定得到改善(NEJM 2003，348：800；NEJM 2003， 348：808)。然而，这些化学药物具有根本性的局限性，给药停止后，大多数病人的 血清HBV DNA水平和丙氨酸转氨酶(ALT)水平可能再次增加。IFN-α(商品名： Intron-A；制造商：Schering-Plough)通常增大宿主的免疫应答，以此展示出诸如 抑制HBV复制的疗效。然而，IFN-α可能导致严重的副作用，并且IFN-α的疗效 仅为25-30％。因此，为了克服目前的治疗性药物的缺点，需要具有高安全性和有 效性的新治疗药物。

许多最近的临床研究强调了CD4 T细胞免疫应答的重要性，如在Liver， 1998，18：405；Vaccine.2001，19：2395中所述的，或CD8 T细胞免疫应答的重要性， 如在J Exp Med.1995，181：1047；J Infect Dis.1993，168：1133中所述的，其更具效 力，对多个抗原具有特异性(此后缩写为“多重特异性”)，用于慢性乙型肝炎患者 的治疗和恢复。也就是说，从乙型肝炎自然恢复的患者显示多重特异的和持久的 CD4和CD8 T细胞免疫应答，而慢性乙型肝炎患者显示出微弱的和临时的CD4和 CD8 T细胞免疫应答，其仅针对一些HBV表位而诱导。另外，据报道，这些T细 胞具有差的增殖能力和低的细胞因子合成能力。已经发现大约1-2％的慢性乙型肝 炎患者自然治愈。慢性乙型肝炎的治疗标记物之一——HBsAg的血清转变之前， 观察到细胞介导的免疫应答，因此细胞介导的免疫应答在慢性乙型肝炎的治疗中 是重要的(J Hepatol，2006 2；[Epub ahead ofprint])。这些研究支持对能够诱导有效 且多重特异性的细胞介导的免疫应答的治疗的需求，用于治疗乙型肝炎。