[发明专利]一种检测胆固醇代谢异常易感遗传风险的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种检测胆固醇代谢异常易感遗传风险的试剂盒，通过同时检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因(ABCA1)、载脂蛋白B基因(APOB)、载脂蛋白E基因(APOE)和脂蛋白脂酶基因(LPL)上的单核苷酸多态性位点基因型来评估个体胆固醇代谢异常易感遗传风险。

背景技术

胆固醇是体内最丰富的固醇类化合物，它既作为细胞生物膜的构成成分，又是类固醇类激素、胆汁酸及维生素D的前体物质。因此对于大多数组织来说，保证胆固醇的供给，对维持其代谢平衡是十分重要的。胆固醇广泛存在于全身各组织中，其中约1/4分布在脑及神经组织中，占脑组织总重量的2％左右。肝、肾及肠等内脏以及皮肤、脂肪组织亦含较多的胆固醇，每100g组织中约含200至500mg，以肝为最多，而肌肉较少，肾上腺、卵巢等组织胆固醇含量可高达1％-5％，但总量很少。生物体有非常精细的机制以调控胆固醇代谢平衡，但当胆固醇代谢出现障碍时，来自膳食的胆固醇不能从血液中被迅速代谢，当体内总胆固醇过高，超过合成生物膜、胆汁酸及类固醇激素等的需要时，将造成血中胆固醇浓度过高，常会导致心血管疾病、阿尔海默氏病及胆结石等的发生。

胆固醇代谢异常会造成冠状动脉粥样硬化性心脏病，三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因(ABCA1)与冠状动脉粥样硬化性心脏病密切相关。三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白是一种整合膜蛋白，它以ATP为能源，促进细胞内游离胆固醇和磷脂的流出，在胆固醇逆转运(RCT)和HDL生成的起始步骤中起重要作用，被称作RCT守门人。核受体PPARs、LXRs和FXR对abca1蛋白的表达具有调控作用。人体50种组织中存在有ABCA1 mRNA，在胰、肝、肺、肾上腺和胎儿组织中ABCA1表达水平最高，ABCA1功能障碍将导致巨噬细胞内大量的胆固醇沉积而成为泡沫细胞，继而浸润血管壁，促进动脉粥样硬化的发生发展。以医院为基础的病例-对照研究。经冠状动脉造影确诊的冠心病病例224例，为江苏省人民医院、无锡市第一人民医院住院患者，同一地区正常对照248例。分别以PCR-RFLP和PIRA-PCR对abca1第219密码子G→A(Arg219Lys)和第883G→A(Met883Ile)密码子多态进行检测，比较不同基因型与个体血脂水平和冠心病患病风险的关系。结果吸烟、高血压和高血糖是冠心病的独立危险因素。与携带219RR基因型者比较，携带至少1个219K等位基因者(即RK和KK基因型)冠心病患病风险显著降低59％(OR＝0.41，95％CI＝0.27-0.61)。而两位点联合作用分析发现携带219RR，883MM或883MI基因型者比较，携带其他组合基因型的个体冠心病患者风险降低61％(OR＝0.39，95％CI＝0.26-0.60)。另外，对照组中携带219K等位基因血清HDL-C水平显著高于219K非携带者(p＝0.37)，提示Arg219Lys位点的多肽改变主要通过改变HDL-C水平影响个体冠心病的患病风险。ABCA1的R219K可能与中国汉族人群冠心病遗传易感性有关，血清高密度脂蛋白可能是其作用靶点。

胆固醇代谢异常还会造成高脂血症。由于脂肪代谢或运转异常使血浆中一种或儿种脂质高于正常称为高脂血症，可表现为高胆固醇血症、高甘油三酯血症或两者兼有，即混合型高脂血症。目前科学研究已知，载脂蛋白B(APOB)、载脂蛋白E(APOE)和脂蛋白脂酶(LPL)三种基因与高脂血症有密切关系。

载脂蛋白B(APOB)蛋白是乳糜微粒和低密度脂蛋白(LDL)最主要的转运蛋白。可以形成低密度脂蛋白胆固醇，通过肝脏细胞表面的低密度脂蛋白受体LDLR介导的细胞内吞作用将脂质代谢的残余物进行清除。已有的研究发现APOB基因上的多个多态位点的改变而引起的基因结构变化可能导致编码的载脂蛋白apoB和胆固醇结合后的脂蛋白复合物与肝脏细胞上的低密度脂蛋白受体结合能力下降，导致低密度脂蛋白胆固醇类在血浆中聚积，无法被排出体外，发生高脂血症。严重者可对血管的正常运作产生阻碍，引起动脉粥样硬化和冠心病。通过一系列的关联性分析研究发现，载脂蛋白B基因Xba I位点上T等位基因，在一定程度上影响体内脂质代谢，是血脂增高的内在易感因素。