[发明专利]一种中药膜荚黄芪的质量检测方法

说明书

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及中药膜荚黄芪的质量检测方法。

技术背景

中约膜荚黄芪为豆科植物膜荚黄Astragakus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。中药膜荚黄芪具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌的功效。是我国应用最为广泛的滋补中药之一。现代科学研究证明，中药膜荚黄芪中含有皂苷、黄酮、多糖和生物碱等多种化学成分。其中的皂苷类成分为三萜皂苷类化合物，黄酮类成分主要为异黄酮及其苷类化合物，此两类成分为普遍认可的中药膜荚黄芪中有效成分。现在市场上中药黄芪品种众多，而各品种之间的化学成分及含量均有差异，若化学成分和含量不能达到质量要求，势必会影响临床应用的安全性以及有效性。为确保中药使用的安全有效，对中药材进行准确可靠的质量检测是十分必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种中药膜荚黄芪的质量检测方法，该方法利用中药膜荚黄芪粗提物的电喷雾质谱作为指纹图谱，利用紫外-可见分光光度法确定中药膜荚黄芪中总皂苷、总黄酮的含量，保证了质量检测方法的准确性和质量检测标准的先进性。

本发明利用软电离质谱技术对中药膜荚黄芪的粗提物进行检测，根据得到的中药膜荚黄芪粗提物的电喷雾指纹图潜中皂苷及黄酮的个数及强度，对中药膜荚黄芪的质量进行初步评价。该指纹图谱可以清晰反映出由于产地、采收季节所带来的皂苷和黄酮种类的不同。本发明考虑到中药膜荚黄芪中所含皂苷类成分为三萜皂苷类化合物，基于三萜皂苷与香草醛-浓硫酸能发生显色反应这一原理，以黄芪甲苷作为标准对照品，通过测定总皂苷水解产物中黄芪甲苷的含量来测定中药膜荚黄芪中总皂苷含量。而总黄酮的含量测定采用芦丁作为标准对照品，硝酸铝与黄酮类化合物形成配合物的显色原理进行测定。

实施本发明的技术方案如下：

(1)供试样品溶液制备

本发明选择50％-100％(V/V)的乙醇作为溶媒，将中药膜荚黄芪粉碎，过40-60目筛，称取已粉碎的中药膜荚黄芪5-10g于200ml锥形瓶中，加50％-100％(V/V)的乙醇50-100ml，通过超声提取1-3次，20-40min/次，超声提取温度20-60℃；合并上述提取液并浓缩，水定容至10ml容量瓶中，即为样品溶液a，饱和正丁醇萃取样品溶液a 2-4次，20-40ml/次，分别合并各次萃取的正丁醇溶液，减压蒸干，残渣以甲醇溶解并定容至10ml容量瓶中，摇匀，即为供试样品溶液；

(2)供试样品的电喷雾指纹图谱

样品的电喷雾指纹图谱通过如下步骤得到：取5-10μl的供试样品溶液，用甲醇稀释至100-500μl，作电喷雾质谱分析。电喷雾质谱实验条件如下：电喷雾离子源，正离子电离方式，喷雾电压3.5-5.5kV，毛细管温度180-220℃，流动注入泵进样流速2-8μl/min；扫描范围质荷比(m/z)50-2000。利用正离子电喷雾质谱确认皂苷的种类，在m/z 700-1000范围内，存在m/z 785，m/z 827，m/z 869，m/z 911，m/z 947等离子；利用正离子电喷雾质谱确认黄酮的种类，在m/z 50-600范围内，存在m/z 269，m/z285，m/z 301，m/z 303，m/z 431，m/z 447，m/z 463，m/z 465，m/z 517，m/z 533，m/z 549，m/z 551等离子。

(3)总皂苷含量测定

总皂苷含量测定的方法：精密称取干燥的黄芪甲苷标准对照品50mg，用无水乙醇溶解并定容至10ml容量瓶中，摇匀，即为黄芪甲苷标准对照品溶液，备用；香草醛配成8％乙醇溶液；硫酸配成72％(V/V)溶液；用移液枪精密移取黄芪甲苷标准对照品溶液0、15、30、45、60、75μl及10μ1供试样品溶液分别置于七个10ml具塞试管中，分别加入无水乙醇至2ml，再分别加入0.5ml的8％香草醛乙醇试剂，在冰水浴中加入7.5ml 72％(V/V)硫酸溶液，摇匀，于62℃水浴保温20min，取出，摇匀，作为待测溶液；在30min内，于530-560nm波长处测定待测溶液的吸光度，以黄芪甲苷标准对照品溶液的吸光度(A)为纵坐标，对应黄芪甲苷标准对照品浓度(C)为横坐标进行线性回归，得到黄芪甲苷标准对照品的标准工作曲线和线性回归方程，然后根据供试样品溶液的吸光度和得到的黄芪甲苷标准对照品的标准工作曲线，测得供试样品中总皂苷的含量。

(4)总黄酮含量测定