[发明专利]一种高效生产腺病毒的方法无效
| 申请号： | 200710073190.X | 申请日： | 2007-01-31 |
| 公开（公告）号： | CN101235365A | 公开（公告）日： | 2008-08-06 |
| 发明（设计）人： | 董艳荣;郭卫华;石志斌;黄伟东;彭忞;曾小平;敖然;秦华;周向军 | 申请（专利权）人： | 深圳市清华源兴生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N15/861;A61K48/00 |
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| 地址： | 518057广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 生产 病毒 方法 | ||
1. 一种生产腺病毒的方法，该方法包括下列步骤：
a)接种宿主细胞，使细胞在培养基中生长；
接种宿主细胞于生物反应器中，接种密度为1-5×105个细胞/ml，进行灌流培养。
b)置换生物反应器内的培养液，用腺病毒感染所述宿主细胞，病毒繁殖；
当生物反应器内的细胞量达到5×106-3×107个/ml时，用病毒培养液置换生物反应器内的细胞培养液，然后接种病毒，并使病毒在生物反应器内进行繁殖。当葡萄糖浓度下降至1.0-1.5g/l时开始灌流，维持生物反应器罐体内葡萄糖浓度为0.1-1.6g/l。
c)收集病毒悬液并浓缩。
通过监测生物反应器内培养液中病毒浓度，当病毒浓度达到1×1010vp/ml时收集病毒悬液。
d)浓缩病毒上清。
将收获的病毒上清进行超滤浓缩。
2. 根据权利要求1中的方法，还包括用层析将腺病毒从所述浓缩液中分离出来。
3. 根据权利要求1中的方法，其中的宿主细胞是能包装重组腺病毒的细胞。
4. 根据权利要求1中的方法，其中的宿主细胞为HEK293细胞。
5. 根据权利要求1中的方法，其中的宿主细胞为A549细胞。
6. 根据权利要求1中的方法，其中的宿主细胞为PER.C6细胞。
7. 根据权利要求1中的方法，其中病毒感染宿主细胞的病毒感染复数(MOI)为5-50。
8. 根据权利要求7中的方法，其中病毒感染宿主细胞的病毒感染复数(MOI)为5-25。
9. 根据权利要求1中的方法，其中所述病毒培养液是DMEM+0.01-2％血清。
10. 根据权利要求1中的方法，其中所述细胞培养液是DMEM+2-10％血清。
11. 根据权利要求10中的方法，其中所述细胞培养液是DMEM+5-10％血清。
12. 根据权利要求1中的方法，其中的腺病毒是人腺病毒。
13. 根据权利要求12中的方法，其中的腺病毒是人5型或35型或2型或6型腺病毒。
14. 根据权利要求1中的方法，其中的腺病毒是动物腺病毒。
15. 根据权利要求1中的方法，其中的腺病毒是包含编码外源基因的重组腺病毒。
16. 根据权利要求15中的方法，其中的腺病毒包括用于基因治疗的重组腺病毒和用于疫苗的腺病毒载体。
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