[发明专利]大鼠结肠成纤维细胞培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞培养方法，特别是指一种大鼠结肠成纤维细胞培养方法。

背景技术

生物体是一种非常复杂的巨系统。在系统内，不同的器官、组织、细胞以及不同的生物活性物质之间存在错综复杂的相互关系。在生物体内部，几乎不存在“自由”的细胞。任何一种细胞随时随地都处在整个生物系统的统一调控与影响之中。而通过体外培养技术，可以将生物体的活体结构成分甚至生物个体从体外或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中观察其生长和发育。因其具有简化细胞的生长环境、方便施加实验因素以及便于观测实验结果等方面的优点而备受关注。

肠纤维化的形成是由于肠道组织对于肠道慢性炎症过度的、不可逆的应答造成。病理表现为肠道肌层的过度生长、胶原组织的过度沉积、肠道固有层、肌层、粘膜下层以及固有肌层和浆膜层内间充质细胞的过度生长。肌层的过度生长以及纤维化最终导致肠腔狭窄，是迁延不愈的炎症性肠病的共同病理表现[Jolanta B，Pucilowska，Kristen L，，et al，Fibrogenesis IV，Fibrosis and inflammatory bowel disease，cellularmediators and animal models，Am J Physiol Gastrointest LiverPhysiol，2000，4(279)，653-659]。由于研究方法的局限，目前国内关于肠纤维化发病机制的研究甚少。

国外资料表明[LawranceIC，Maxwell L，Doe W，Altered responseof intestinal mucosal fibroblasts to profibrogenic cytokines ininflammatory bowel disease，Inflamm Bowel Dis，2001，7(3)，226-36；Lawrance，Ian Craig，Maxwell，Lesley，Doe，William，InflammationLocation，But Not Type，Determinses the Increase in TGF-[beta]1andIGF-1Expression and Collagen Deposition in IBD Intestine，InflammBowel Dis，2001，7(1)，16-26]，成纤维细胞是肠纤维化发生发展过程中的关键细胞之一，因此，以肠道成纤维细胞为研究的切入点有可能是发现肠纤维化发病机制的有效途径。掌握分离培养肠道成纤维细胞的技术便是探索肠纤维化机制的关键技术。目前，国内尚无相关报道，若按国外文献[James G，Simmons，Jolanta B，Pucilowska，IGF-I and TGF-β1 havedistinct effects on phenotype and proliferation of intestinalfibroblasts，Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，，2002，283，809-818；James G，Simmonsl，Jolanta B，Pucilowska，and P，Kay Lund，Autocrine and paracrine actions of intestinal fibroblast-derivedinsulin-like growth factors，Am J Physiol Gastrointest LiverPhysiol，1999，276，817-827]极力推荐的消化法分离培养结肠成纤维细胞(CFB)，其所需消化酶种类多，价格昂贵，操作繁琐，污染机会较大，不易普及。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种大鼠结肠成纤维细胞培养方法，它可以缩短消化时间，仅用单一的胰蛋白酶节约成本，减少污染机会。