[发明专利]猪繁殖与呼吸综合症病毒毒株及由其制备的灭活疫苗

权利要求书

1.猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and RespiratorySyndrome Virus)TJ株，其微生物保藏号是：CGMCC NO.2129。

2.一种制备预防猪繁殖与呼吸综合征的灭活疫苗的方法，包括：将权利要求1的猪繁殖与呼吸综合征病毒TJ株进行大规模培养，收获病毒液，将病毒液灭活后制成水相，将水相与油相乳化后，即得。

3.按照权利要求2的方法，其特征在于，所述的病毒液按照下述方法制备：培养Marc-145细胞；将权利要求1的猪繁殖与呼吸综合征病毒TJ株经连续传代和多次噬斑克隆纯化后以感染剂量接种到Marc-145细胞上进行大规模培养，收获病毒液。

4.按照权利要求3的方法，其特征在于：将权利要求1的猪繁殖与呼吸综合征病毒TJ株经连续传代和多次噬斑克隆纯化后以感染剂量0.01-0.5接种到Marc-145细胞上进行培养，培养3-5天，当细胞病变达到80％时收获病毒液。

5.按照权利要求3的方法，其特征在于，所述的Marc-145细胞按照以下任意一种方法培养得到：(1)在转瓶中培养Marc-145细胞，使Marc-145细胞密度达到5-10×10⁷/ml；(2)在生物反应器中添加附着载体的悬浮培养或无载体的悬浮培养，使Marc-145细胞密度达到5-10×10⁷/ml；(3)将Marc-145细胞在无血清或1-5％的低浓度血清中悬浮培养。

6.按照权利要求2的方法，其特征在于，所述的油相按照以下方法制备：向65-90体积份注射用白油中加入5-15体积份司班80和5-25体积份吐温80，随加随搅拌至透明为止，灭菌后，备用。

7.按照权利要求2的方法，其特征在于，所述的乳化包括以下步骤：取水相放于乳化缸内，慢速转动搅拌，同时徐徐加入油相，加完后再以10000r/min～15000r/min搅拌10～30分钟，在终止搅拌前加入10％硫柳汞溶液，使其最终浓度为0.01％。

8.按照权利要求2的方法，其特征在于，所述的病毒液灭活方法是：向病毒液中加入二乙烯亚胺至其终浓度为1mM-3mM，在37℃条件下灭活4-28h；病毒液灭活后再用硫代硫酸钠中和。

9.猪繁殖与呼吸综合征病毒的灭活疫苗，其特症在于：由权利要求2-8任何一项方法所制备得到。