[发明专利]快速检测腹泻性贝毒的免疫胶体金试纸条及其制法

说明书

技术领域：

本发明涉及检测赤潮毒素的检测器具，特别是涉及一种腹泻性贝毒(Diarrhetic shellfish poisoning，DSP)的快速检测试纸条，另外还涉及其制法。

背景技术：

赤潮灾害日益严重，已成为一种全球性的海洋生态灾害。腹泻性贝毒是由有毒赤潮藻类鳍藻属和原甲藻属产生的一类脂溶性多环醚类天然化合物，主要成分是软海绵酸(Okadaic acid，OA)及其衍生物，经过双壳贝类等率食性动物的食物链传递，能引起人类食用者发生中毒，产生腹泻、恶心、呕吐及肠胃绞痛等，OA是强烈的蛋白磷酸酶抑制剂，是一种很强的促癌剂，是目前极受关注的海洋生物毒素。腹泻性贝毒的分析方法主要有生物小鼠法、高效液相色谱法以及一些免疫化学方法。其中小鼠法简便易行，适合于大规模、批量样品的检测，该法的缺点是不能区别毒素的种类和结构、干扰大、不精确；现在被广泛接受且较为完善的高效液相色谱分析方法在许多国家使用，可以准确分析确定毒素的含量和种类，检测限可低至ng/g，缺点是样品前处理繁琐费时，仪器昂贵，对操作人员的技术要求较高，严重的阻碍了这种分析方法的普及推广，更无法实现现场检测。免疫化学方法是利用抗体对抗原的特异性结合建立的分析方法，具有灵敏度高，特异性强，仪器设备简单易操作、样品前处理相对简单等优点，适用于一定条件下的现场监测和大量样本快速筛查；目前德国、日本等公司生产的ELISA检测DSP的试剂盒，是以竞争性酶联免疫反应为检测原理，检测全过程需2-4小时，可一次检测多个样品，即可定性又可定量，但存在假阳性问题；由于ELISA是一种很敏感的技术，分析结果的变异性较大，不同分析人员的结果有差异，结果判断往往需要有经验的操作人员，容易发生误检和漏检，同时腹泻性贝毒组分化学结构较多，各异构体之间也存在一定的抗原性差异，且检测时间也比较长，实现真正的野外现场操作有困难。

近年来，我国每年均有在贝中检测出腹泻性贝毒的报道，虽然其急性中毒未发生有死亡的案例，但其肿瘤促进剂的慢性效应不容忽视，已引起了全世界的关注。建立腹泻性贝毒的快速灵敏准确的检测方法和产品，对确保海产品食用安全具有十分重要的意义。

发明内容：

本发明的目的是克服上述腹泻性贝毒检测技术的不足，提供一种特异、敏感和简便的快速检测腹泻性贝毒的免疫胶体金试纸条；用胶体金标记抗体，通过竞争免疫反应，快速检测贝类中的软海绵酸；简单易操作，快速，不需任何其他仪器设备，非专业人员可现场使用，产品性能稳定。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：一种快速检测腹泻性贝毒的免疫胶体金试纸条，包括样本垫、胶金垫、赛多利斯NC膜、吸水垫和PVC背衬；其具体结构是在PVC背衬上按顺序依次粘附有样本垫、胶金垫、赛多利斯NC膜、吸水垫，胶金垫上包被有胶体金标记的抗软海绵酸单克隆抗体，赛多利斯NC膜上分别包被有软海绵酸与卵清蛋白偶联物构成的检测线和羊抗鼠多抗构成的质控线。

所述抗软海绵酸单克隆抗体为用软海绵酸-血蓝蛋白偶联物免疫Balb/c小鼠，经细胞融合，筛选得到抗软海绵酸单克隆抗体的杂交瘤细胞系分泌的。

所述样本垫、胶金垫、NC膜、吸水垫按顺序依次粘附在PVC背衬上并装在试纸条卡里，上面开有加样孔和显色区。

所述试纸条为检测腹泻性贝毒主要成分软海绵酸的试纸条。

所述快速检测腹泻性贝毒的免疫胶体金试纸条的制法，其步骤包括：

1、将软海绵酸与载体蛋白偶联，制备得到软海绵酸-载体蛋白偶联物；

2、用软海绵酸-血蓝蛋白偶联物免疫Balb/c小鼠，经细胞融合，筛选得到分泌抗软海绵酸单克隆抗体的杂交瘤细胞系；

3、制备抗软海绵酸单克隆抗体；

4、用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；

5、将步骤3制得的抗软海绵酸单克隆抗体加入步骤4制备得到的胶体金中，得到抗软海绵酸单克隆抗体-胶体金标记物；

6、将抗软海绵酸单克隆抗体-胶体金标记物喷点(包被)在胶金垫上：

7、将软海绵酸-卵清蛋白偶联物喷点(包被)在NC膜上构成检测线，并将羊抗鼠多抗喷点(包被)在NC膜上构成质控线。

8、将样本垫、胶金垫、NC膜、吸水垫按顺序依次粘附在PVC背衬上，并包装在试纸条卡里，上面开有加样孔和显色区，得到检测软海绵酸的免疫胶体金试纸条。

所述快速检测腹泻性贝毒的免疫胶体金试纸条在检测软海绵酸中的应用。