[实用新型]检测孕酮的胶体金免疫试纸

说明书

技术领域

本发明涉及一种通过检测人体尿液中的孕酮水平，判断女性卵巢功能，属于胶体金免疫诊断技术领域。

背景技术

孕酮是21位碳原子的类固醇激素，分子量为314.5。孕酮与雌激素一起调节与月经周期有关附属器官功能，尤为重要的是维持妊娠以及为胚细胞着床到子宫内膜做准备。非孕女性孕酮主要由黄体分泌，而孕妇则主要由胎盘分泌。男女两性的肾上腺皮质及男性的睾丸也分泌少量孕酮。血循环中的孕酮主要与皮质类固醇结合球蛋白(CBG)，性激素结合球蛋白(SHBG)以及白蛋白结合而运输，所有循环的孕酮中，只有2-10％为游离形式。

血中及尿中孕酮浓度随月经周期而有明显变化。卵泡期小于1ng/ml(3.2mol/L)，在黄体期为10-20ng/ml(32-64mol/L)最高水平是在排卵后4～7天，并继续保持高水平4～6天，直到月经前24小时降回到排卵前水平。因为孕酮水平的升降与卵泡和黄体功能有关，测定血浆或尿液孕酮水平临床用于判断有无排卵和非孕妇的黄体功能。如果没有排卵，黄体不形成，就没有血浆孕酮水平的周期性升高。异常的孕酮分泌与经前期紧张、了宫内膜不规律剥脱、痛经和黄体功能不全有关。

孕酮的测定方法有气相层析法、蛋白结合分析法及放射免疫法及化学发光法。由于血中孕酮含量较低，目前应用较多的方法为蛋白结合分析、放射免疫分析法(RIA)及磁性微粒分离的免疫酶联测定法(IEMA)及发光法。这些方法需要特殊防护设备、严苛的条件、价格昂贵的仪器和训练有素的人员，而且操作费时、样本存储困难，不易于推广应用。

免疫分析为孕酮的检测提供了一个新的分析检测途径，现已有利用免疫胶体金方法制成试纸的报道：中国专利200510109165.3用于奶牛早期妊娠诊断的试纸及其检测方法。该发明为通过胶体金免疫法来检测配种后奶牛乳汁中的孕酮含量，现场诊断奶牛早孕的检测试纸及其检测方法。本发明为通过检测人体尿液中的孕酮，体外定性检测女性卵巢功能，技术特点及用途均不同，不构成侵权。

发明内容

本发明克服了现有技术中存在的一些缺点，提供了一种通过胶体金免疫法检测人体尿液中的孕酮，从而体外定性检测女性卵巢功能。

本发明是通过以下技术方案实现的：

在孕酮胶体金诊断试纸底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有一条试验线和一条羊抗鼠多克隆抗体控制线，在底板一端端头为吸水层，另一端端头为尿液吸液层，硝酸纤维素膜两端分别与吸水层和单克隆抗体金标垫相互交叠连接(交叠连接部分在1-2毫米范围)，在单克隆抗体金标垫上压有样品吸液层。

硝酸纤维素膜上有一条试验线和一条多克隆抗体控制线。控制线是由羊抗鼠多克隆抗体包被制成；通过免疫筛选出针对一种免疫原的两种配对单抗，一种称为单克隆抗体I用于包被试验线，另一种称为单克隆抗体II用于胶体金标记，共同与免疫原有亲合作用，利用双抗夹心法原理制成的试纸。

把孕酮胶体金诊断试纸的样品吸液层端放入待测的尿液中(液面不得超过MAX线)，由于毛细管作用尿液将沿着试纸条吸水层端移动，在上行过程中，尿液中的孕酮与抗孕酮单克隆抗体金标探针发生特异结合，当移动至固定有孕酮单克隆抗体I的试验线时，尿液中的孕酮另一位点又与试验线中的孕酮单克隆抗体I相结合，因此其胶体金滞留于试验线上，试验线处显示红色，为阳性；相反如果尿液中没有孕酮，抗孕酮单克隆抗体金标探针就不会与试验线上的孕酮单克隆抗体I发生特异结合，没有胶体金滞留。即仅有一条红色控制线为阴性，这就是双抗夹心法原理。根据此原理，两条线为阳性，一条线为阴性得出诊断。

当移动至羊抗鼠多克隆抗体控制线时，无论尿液中有无相应抗原，标记的金标探针都会与已设定好的羊抗鼠多克隆抗体结合滞留，使控制线显示红色。因此控制线无色带产生则代表操作有误，检测时尿液液面超过MAX线或试纸已经过期。

由于采用上述技术方案，本发明所提供的检测孕酮的胶体金免疫试纸具有这样的有益效果，即特异性强，灵敏度高，易储存，无须专门技术人员操作，而且结果易读。

附图说明

图1为本发明的主视结构图。

图2为图1的俯视剖视结构图。

图3为阴性结果图。

图4为阳性结果图。

图中1、吸水板，2、硝酸纤维素膜，3、羊抗鼠多克隆抗体控制线，4、试验线，5、单克隆抗体金标垫，6、尿液吸液层，7、底板，8、MAX线。

具体实施例

1.化学合成方法合成两种不同结合位点的孕酮免疫原(孕酮-BSA)。

2.孕酮单克隆抗体的制备。