[发明专利]一种单克隆抗体1F1及其应用以及分泌该抗体的杂交瘤细胞系BCSP31－1F1

说明书

技术领域

本发明属于免疫应用领域，涉及分子生物学、免疫学等相关领域，特别涉及抗羊布鲁菌BCSP31蛋白的单克隆抗体1F1和分泌所述抗体的杂交瘤细胞系BCSP31-1F1，以及应用所述单克隆抗体在制备用于检测布鲁菌以及诊断布鲁菌病检测试剂方面的应用。本发明还涉及抗布鲁菌BCSP31单抗的重链和轻链可变区基因及其编码多肽，以及所述基因和多肽在制备用于诊断或治疗布鲁菌及其炎症方面药物中的应用。

背景技术

布鲁菌(Brucella)以往也曾称为布氏杆菌，可感染羊、牛、猪等家畜，也可以感染人类，引起人类布鲁菌病。布鲁菌可通过皮肤、黏膜、肠道和呼吸道等多种途径感染，并侵犯人体多种组织和器官，其所致疾病的病理变化和临床表现多样而复杂，且不稳定，因此布鲁菌病临床诊断较为困难，也缺乏有效的预防制剂。

布鲁菌病是全球范围内传播最为广泛的动物疫源性疾病之一。据世界卫生组织报告，目前世界上有160多个国家和地区的人、畜间有布鲁菌病发生和流行；全球每年约有50万人患布鲁菌病。我国的《传染病防治法》将布鲁菌病规定为乙类传染病，并被列为《家畜家禽防疫条例实施细则》中二类传染病之首。目前国内在25个省、区、直辖市范围内的1200多个市县的人畜间有不同程度的布鲁菌病疫情存在，受威胁人口达3亿人之多。特别是近十年来，我国人间布鲁菌病疫情出现明显回升，其回升的幅度逐年增加，有愈演愈烈之势。此外，布鲁菌病不仅严重危害人类健康，而且对我国的畜牧业发展影响巨大，牛、羊、猪等家畜感染布鲁菌后，可造成大量家畜不孕、不育或大量流产、死胎等。据统计，我国内蒙、新疆、青海等主要牧区每年因布鲁菌病造成的牲畜流产、空怀等致使少生幼畜超过千万头，经济损失在十亿元以上。另外从近年来SARS和禽流感发生、流行和防治的经验及教训看，目前尤应特别重视人畜(兽)共患传染病的病原学研究及其诊断、预防和治疗工作。

布鲁菌BCSP31蛋白是一种存在于布鲁菌外膜表面，免疫原性强，为可溶性蛋白质^[4]，其分子量为31kDa。BCSP31蛋白在布鲁菌的6个种中具有保守性。已有初步实验证明BCSP31是一种毒力因子，其作用可能是直接或间接地抑制机体巨噬细胞的增殖从而降低免疫系统杀死感染细胞的能力。此外，基因缺失研究表明，BSCP31并不影响细菌侵袭力和生长速度^[7]。近年来已经证实BCSP31具有良好的免疫原性，是重要的免疫保护性抗原之一，可诱导机体产生以B细胞免疫为主的保护性免疫反应^[6]。

BCSP31具有高保守性，在多种可感染人的布鲁菌中同源性高，因此BCSP31在布鲁菌病的检测方面有着潜在的重要作用。当前布鲁菌病的主要血清学检测方法是虎红平板试验，但这种方法测得的假阳性率较高。Zeki等指出，在ELISA检测方法的辅助下，可有效降低虎红平板实验假阳性率。因此建立一种基于布鲁菌BCSP31蛋白的ELISA检测方法或者检测试剂盒就显得尤为可行。

国内在上世纪九十年代陆续制备出抗布鲁菌表面抗原A和M(抗原A和M为布鲁菌菌体抗原，为脂多糖)的单克隆抗体以及几种粗糙型布鲁菌(未鉴定抗原)的单克隆抗体，主要应用于不同种型的鉴定。另外采用抗布鲁菌单克隆抗体制备了独特型抗体(多克隆抗体)，加佐剂后免疫牛，结果表明其刺激产生的凝集素抗体很快消失，而不完全抗体则可维持一年以上。但上述单克隆抗体均未在布鲁菌病的诊断、预防和治疗中实际应用。国内针对BCSP31的单克隆抗体的研究尚无报道。

发明内容

本发明遵循“人畜兼顾”的原则，对与布鲁菌感染和免疫相关的基因BCSP31进行表达、纯化和鉴定；采用杂交瘤技术制备了针对BCSP31蛋白的一种单克隆抗体。所述单克隆抗体可以应用于布鲁菌的检测和布鲁菌病的诊断与治疗。

本发明的一个目的在于提供抗羊布鲁菌BCSP31蛋白的单克隆抗体1F1以及提供可以持续分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞系BCSP31-1F1。

本发明的另一个目的在于提供抗BCSP31抗原的单抗的重链和轻链可变区基因及其编码的多肽。

本发明的又一个目的在于以所述单克隆抗体及其基因或多肽在检测布鲁菌以及诊断或治疗人或动物布鲁菌病制剂或药物方面的应用。

本发明是这样实现的：