[发明专利]一种用磁性纳米颗粒固定β－葡萄糖苷酶的制备方法

权利要求书

1.一种用磁性纳米颗粒固定β-葡萄糖苷酶的制备方法，包括：

(1)将0.1～1M的Fe²⁺和Fe³⁺的氯化物溶液以1∶2～2∶3的体积比混合后，用1～6M的NaOH溶液在80-90℃，pH8～10下高速搅拌进行沉淀反应制得大小8～10nm的Fe₃O₄颗粒；

(2)将1～2g壳聚糖溶解在100～200mL质量分数为10～30％的醋酸溶液中，形成均一透明的胶体溶液，再将制备的Fe₃O₄颗粒加入，搅拌20～30min，得到磁性纳米颗粒，用蒸馏水反复洗涤至中性，烘干待用；

(3)将制得的磁性纳米颗粒加入到β-葡萄糖苷酶溶液中，经吸附-交联得到壳聚磁性纳米颗粒固定化酶；

(4)分别在0.1～0.5g固定化β-葡萄糖苷酶和游离β-葡萄糖苷酶溶液中加入0.1～0.5MpH＝3.0～9.0的缓冲溶液，20℃～80℃调温度后进行反应，每隔一周测定其酶活性。

2.根据权利要求1所述的用磁性纳米颗粒固定β-葡萄糖苷酶的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的Fe²⁺和Fe³⁺的氯化物溶液浓度为0.2～0.5M，NaOH溶液浓度为3～5M。

3.根据权利要求1所述的用磁性纳米颗粒固定β-葡萄糖苷酶的制备方法，其特征在于：步骤(2)所述的醋酸溶液质量分数为15～25％。

4.根据权利要求1所述的用磁性纳米颗粒固定β-葡萄糖苷酶的制备方法，其特征在于：步骤(3)所述是采用体积分数为25％的戊二醛溶液将β-葡萄糖苷酶溶液交联在磁性纳米颗粒上。

5.根据权利要求1所述的用磁性纳米颗粒固定β-葡萄糖苷酶的制备方法，其特征在于：步骤(3)所述的β-葡萄糖苷酶溶液的总酶活为5～10IU。

6.根据权利要求3所述的用磁性纳米颗粒固定β-葡萄糖苷酶的制备方法，其特征在于：步骤(4)所述的缓冲溶液是pH＝4.0～8.0的柠檬酸缓冲溶液。

7.根据权利要求1所述的用磁性纳米颗粒固定β-葡萄糖苷酶的制备方法，其特征在于：步骤(4)所述的反应温度是30℃～70℃，反应时间为10～20分钟。

8.根据权利要求1所述的用磁性纳米颗粒固定β-葡萄糖苷酶的制备方法，其特征在于：步骤(4)所述的每隔一周测定其酶活性是指测定其残余酶活力，残余酶活力以初始酶活力的相对百分数表示。