[发明专利]两种甾醇衍生物及其分离提取方法和在防治前列腺增生疾病中的应用

权利要求书

1.如式1所示的24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯或如式2所示的环桉烯醇亚

2.如权利要求1所述的24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯或环桉烯醇亚麻酸酯 的分离提取方法：

(1)用下述两种方法中的任一种提取有效部位：

①二氧化碳超临界提取；

②提取：取破壁后玉米花粉，加弱极性溶剂，加热回流或冷浸渗漉，滤 过，合并滤液，减压回收溶剂，得流浸膏，将流浸膏混悬于水中，分别依次 用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取；取乙酸乙酯萃取部分，减压回收溶剂至干， 得有效部位；

(2)柱层析：将上述有效部位在硅胶层析柱上用洗脱剂进行梯度洗脱， 经正相硅胶薄层层析法检测，收集展开剂为体积比1∶3的石油醚-氯仿时， Rf＝0.4～0.6的洗脱液，减压回收溶剂制得粗产物；

(3)纯化：将步骤(2)所得的粗产物在正相硅胶层析柱上用洗脱剂进 行洗脱，经正相硅胶薄层层析法检测，收集展开剂为体积比1∶3的石油醚-氯 仿时，Rf＝0.4～0.6的洗脱液，减压蒸干，得到洗脱物；将上述洗脱物进行 HPLC反相硅胶柱层析，HPLC反相硅胶柱的规格为Agilent ODS 9.4mm×300mm，以无水乙醇为流动相，设定紫外检测波长为215nm，进行检 测，分别收集化合物1和化合物2对应的峰，挥干溶剂即得化合物1和化合物2， 其中化合物1为24-亚甲基胆甾醇亚麻酸酯，对应的保留时间为19分钟；化合 物2为环桉烯醇亚麻酸酯，对应的保留时间为17分钟。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的步骤(1)②中：所 述的弱极性溶剂为乙醇、丙酮、石油醚和乙酸乙酯中的一种或几种；所述的 弱极性溶剂的用量为3-20ml/g玉米花粉；所述的流浸膏的相对密度为 1.10-1.60；所述的水的用量是1-5ml/g流浸膏；所述的冷浸渗漉的次数为2-3 次；所述的萃取过程中，每种溶剂每次萃取的用量为1-5倍水溶液体积，每 种溶剂萃取2-3次。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的步骤(2)中的硅胶 为100-400目；硅胶的用量为步骤(1)所得的有效部位质量的3-20倍；硅胶 柱的规格为直径0.5cm-200cm，长度为10-1000cm；所述的洗脱剂为下述混合 溶剂中的一种：石油醚-乙酸乙酯、正己烷-乙酸乙酯、环己烷-乙酸乙酯、石 油醚-丙酮、环己烷-丙酮和正己烷-丙酮。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的步骤(2)中的洗脱 剂的梯度为体积比100∶0-100∶20；每个梯度下，洗脱剂的用量为3-5倍柱体积。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述的洗脱剂的梯度为体积 比：100∶0，100∶1，100∶5，100∶20。

7.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的步骤(3)中的硅胶 为300-400目；硅胶用量为3-20倍的样品质量；硅胶柱的规格为直径 0.5cm-200cm，长度为10-1000cm；所述的硅胶层析柱上用的洗脱剂为石油醚- 氯仿，洗脱剂的梯度为体积比1∶0-0∶1，每个梯度洗脱剂的用量为3-5倍柱 体积。