[发明专利]基因工程靶向抗神经胶质瘤Acp－W1蛋白及制备方法和用途

权利要求书

1、一种分离的多肽，其序列为SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

2、一种制备权利要求1所述的一种基因工程靶向抗神经胶质瘤Acp-W1蛋白的方法，其步骤是：

A、设计引物：设计4条PCR扩增引物进行2轮PCR扩增获取W1基因，正向引物为P1：5’GCCGGATCCGATGACGATGACAAAATGTGTATGCCGTGCTTCACTACC3’，引物P2：5’CAATCGTCACATTTACGTGCCATCTGGTGATCGGTAGTGAAGCACGGCAT3’；反向引物为P3：5’CGTAAATGTGACGATTGCTGTGGTGGCAAAGGTCGTGGTAAATGCTACCG3’，引物P4：5’GCCCTCGAGTCAACGGCACAGACAACGCGGACCGTAGCATTTACCACGAC3’；

B、两轮PCR扩增W1基因：第一轮PCR扩增用引物P2和引物P3，第二轮PCR扩增用引物P1和引物P4，第一轮PCR反应的试剂如下：将5微升的10xTaq聚合酶缓冲液、4微升的dNTP混合物、1微升的引物P2、1微升的引物P3、0.25微升的TaqDNA聚合酶和37.75微升的无菌水混合，PCR反应条件：94℃预变性300秒、94℃变性45秒、55℃复性45秒、72℃延伸45秒、72℃最后延伸200秒，循环32次，第二轮PCR中使用引物P1和引物P4，加入第一轮PCR扩增产物稀释50倍的模板1微升，其它反应条件不变，获得扩增带；

C、Acp-W1蛋白的表达和纯化：PCR扩增产物凝胶电泳回收后用BamHI和XhoI双酶切，酶切后的片段插入经BamHI和XhoI双酶切的表达载体pGEX-6p-1，构建重组表达质粒，转化大肠杆菌Rossetta(DE3)，对转化的大肠杆菌异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导培养后，收集菌体，悬浮于缓冲液中，超声波破菌并离心，所得上清通过GST亲和层析胶后收集洗脱液得到融合蛋白，再经超虑脱盐和色谱分离，获得基因工程Acp-W1蛋白。

3、权利要求1所述的一种基因工程靶向抗神经胶质瘤Acp-W1蛋白在制备治疗或预防神经胶质瘤的药物中的应用。