[发明专利]一种黄曲霉毒素G1人工抗原的制备方法

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素G1人工抗原的制备方法，其特征在于首先用间氯过氧苯甲酸氧化黄曲霉毒素G1分子二呋喃环的双键，使其形成活性极强的黄曲霉毒素G₁环氧化物，然后在室温下使黄曲霉毒素G1环氧化物在两相体系中与载体蛋白质上的氨基相连，最后通过透析、冷冻干燥即得到黄曲霉毒素G1人工抗原。

2.按权利要求1所述的黄曲霉毒素G1人工抗原的制备方法，其特征在于所述的间氯过氧苯甲酸氧化黄曲霉毒素G1分子二呋喃环双键的过程为：取间氯过氧苯甲酸6～10毫克溶于1毫升二氯甲烷中，配成浓度为6～10毫克/每毫升的间氯过氧苯甲酸溶液，并用1～2毫升0.1～0.3摩尔每升pH7.0～7.5的磷酸盐缓冲液洗涤2～5遍；取黄曲霉毒素G11～5毫克溶于1～5毫升二氯甲烷中，配成浓度为8～10毫克每毫升的黄曲霉毒素G1溶液，并加入1～5毫升0.1～0.3摩尔每升pH7.0～7.5的磷酸盐缓冲液；将上述间氯过氧苯甲酸溶液和黄曲霉毒素G1溶液混合，并在15～25℃条件下搅拌80～100分钟；将反应终溶液室温静置，待分层后弃去上层水相，保留有机相，该有机相即为黄曲霉毒素G1环氧化物的二氯甲烷溶液。

3.按权利要求1或2所述的黄曲霉毒素G1人工抗原的制备方法，其特征在于所述的黄曲霉毒素G1环氧化物在两相体系中与载体蛋白质上的氨基相连过程为：取黄曲霉毒素G1环氧化物的二氯甲烷溶液(上述氧化步骤最终保留的有机相)1～3毫升，加到4.0～6.0毫升载体蛋白质溶液中，所形成的两相体系于室温下搅拌2-6小时；反应终溶液用1000～3000转每分钟离心分离10～30分钟，取上层水相，并用二氯甲烷洗涤2～5次，保留水相溶液，黄曲霉毒素G1与载体蛋白质的偶联物即存在于最终保留的水相溶液中。

4.按权利要求1或2所述的黄曲霉毒素G1人工抗原的制备方法，其特征在于所述的透析、冷冻干燥过程为：将最终保留的黄曲霉毒素G1与载体蛋白质的偶联物水相溶液密闭于透析袋中，以0.1～0.2摩尔每升pH7.4的磷酸盐缓冲液作为透析液，共透析2～3天，每间隔4～12小时更换1次透析液；最后1次透析结束后，将透析袋中的溶液分装，经冷冻干燥，即得到黄曲霉毒素G1人工抗原。

5.按权利要求3所述的黄曲霉毒素G1人工抗原的制备方法，其特征在于

1)取市售的纯度(以重量计)为85％的间氯过氧苯甲酸9.86毫克溶于1毫升二氯甲烷中，并用1毫升的0.1摩尔每升pH7.0的磷酸盐缓冲液于分液漏斗中洗涤4遍；称取2毫克黄曲霉毒素G1溶于1毫升二氯甲烷中，并加入1毫升的0.1摩尔每升pH7.2的磷酸盐缓冲液；将上述间氯过氧苯甲酸溶液和黄曲霉毒素G1溶液混合，并在22℃条件下磁力搅拌80分钟；将反应终溶液室温静置，待分层后弃去上层水相，保留有机相，该有机相即为黄曲霉毒素G1环氧化物的二氯甲烷溶液；

2)上述步骤1)最终保留的有机相2毫升加到4.0毫升含有牛血清清白蛋白13.6毫克的pH7.2的磷酸盐缓冲溶液中，所形成的两相体系于室温下磁力搅拌4小时；反应终溶液2000转每分钟离心分离20分钟，取上层水相，并用2毫升二氯甲烷洗涤，重复3次，保留水相溶液，黄曲霉毒素G1与牛血清白蛋白的偶联物即存在于最终保留的水相溶液中；

3)将上述步骤2)最终保留的水相溶液密闭于透析袋中，以0.15摩尔每升pH7.4的磷酸盐缓冲液作为透析液，共透析3天，每间隔12小时更换1次透析液；最后1次透析结束后，将透析袋中的溶液分装于离心管中，经冷冻干燥，即得到黄曲霉毒素G1人工抗原的免疫原黄曲霉毒素G1-牛血清白蛋白。