[发明专利]鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物药物的制备技术，特别涉及一种鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法。

背景技术

目前，鸡白细胞介素-2作为一种免疫调节剂，已广泛用于临床。鸡白细胞介素-2是一种天然免疫增强剂。它具有激活T细胞，促进和维持T细胞长期存活；促进B细胞分化及产生抗体、诱导干扰素产生等功能。重组鸡白细胞介素2用于鸡，对疫苗具有良好的免疫增强效果。它能克服了其它常规佐剂所引起的毒性大、难吸收的缺点，而且还可以克服某些疾病引起的免疫抑制状态，减少养禽业中由于病原感染后引起的免疫抑制所导致的重大经济损失。

近年来，免疫抑制病大面积流行已经成了畜禽养殖业的主要威胁之一。因此，鸡白细胞介素-2等免疫调节因子受到了国内外学者的广泛关注。在兽医临床试验中，鸡白细胞介素-2在动物疫病防治方面也取得了满意的效果。

鸡白细胞介素-2都是以注射的途径给药有较好的治疗效果，多者每天需要注射1—2次，连用2-5天，给养殖业主的使用带来很多不便，因此将其制成长效剂型便成为人们追求的目标。已有的鸡白细胞介素-2存在需要长期频繁注射、使用不便、生物利用度低以及药物使用量大等缺陷。

因此，提供一种鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法，有效预防和治疗各种鸡疾病，是该技术领域科研人员急需开发的新课题之一。

发明内容

本发明的目的是为克服已有技术的不足之处，提供一种制备简单、应用方便、效果显著的鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法。

一种鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将一定量的鸡白细胞介素-2溶解在含有稳定剂的PBS缓冲溶液，制成水相溶液(W1)，鸡白细胞介素-2的含量为0.5—50毫克/毫升；

(2)将丙交脂/乙交脂共聚物用二氯甲烷溶解制成油相溶液(O)，丙交脂/乙交脂共聚物的含量为0.1—0.5克/毫升；将上述含鸡白细胞介素-2的水相溶液(W1)加入到油相溶液(O)中，油相溶液(O)与水相溶液(W1)的比例为20∶1至2∶1，使这两种溶液在温度5—30℃下搅拌混合均匀，制成初乳W1/O，在4—10℃下保存；

(3)将聚乙烯醇充分溶解于水制成水相溶液(W2)，聚乙烯醇的重量浓度为0.5-50％；将上述初乳W1/O加入到水相溶液(W2)搅拌均匀，初乳W1/O与水相溶液(W2)的比例为1∶50至1∶200，制成复乳W1/O/W2，在4—10℃下保存；

(4)将复乳W1/O/W2转移到NaCl水溶液中，搅拌均匀，使有机溶剂挥发，然后离心收集微球；

(5)所述步骤(2)中的搅拌温度为5—30℃，搅拌速度为500—8000转/分，搅拌时间为0.02—0.2小时；

(6)所述步骤(3)中的搅拌温度为5—30℃，搅拌速度为100—3000转/分，搅拌时间为0.2—0.5小时；

(7)所述步骤(4)中的搅拌温度为5—30℃，搅拌速度为500—3000转/分，搅拌时间为0.2—0.5小时；

(8)为了保持溶液的稳定，加入一定量的稳定剂，稳定剂直接加入到所述制备步骤(1)溶液中。

所述稳定剂选自海藻糖、牛血清白蛋白和聚乙二醇的一种或一种以上。

所述稳定剂的加入量为最终溶液的0.1％—10％。

所述鸡白细胞介素-2为重组鸡白细胞介素-2和鸡天然白细胞介素-2。

本发明方法的有益效果是：该注射用鸡白细胞介素-2长效剂型能够减少鸡白细胞介素-2用药次数，是一种理想的鸡白细胞介素-2长效剂型。具有制备工艺简单，容易实现，应用方便，所需成本低等特点，该方法采用毒性小，注射安全的分散剂及油相等材料，使鸡白细胞介素-2均匀的分散溶解到油相中，最终成为一种鸡白细胞介素-2的长效剂型。采用该方法制成的鸡白细胞介素-2的长效剂型体外实验表明，用鸡扰素为包裹对象，所制得的鸡白细胞介素-2微球形态圆整，粒度分布均匀，粒径分布在40微米以下，载药量可达6.0％以上，包封率在30.0％以上，体外缓释可以达4周释药，符合长效制剂特征。一次注射后能够在较长时间内发挥抗病毒药效。将鸡白细胞介素-2做成微球制剂，可以延长药物作用时间，大大提高药物疗效和经济效益。

具体实施方式

以下结合实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详述如下：

实施例1

一种鸡白细胞介素-2长效剂型的制备方法，其特征在于具体实施步骤如下：

(1)将60毫克鸡基因工程白细胞介素-2溶解在1毫升含有2％的海藻糖的PBS缓冲溶液，制成水相溶液(W1)；