[发明专利]共表达猪瘟病毒T细胞表位与猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌及其制备方法

权利要求书

1.共表达猪瘟病毒T细胞表位与猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌，其特征在于共表达猪瘟病毒T细胞表位与猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌为重组载体质粒pPG-2-VP2-E290转化的干酪乳杆菌；其中重组载体质粒pPG-2-VP2-E290基因克隆有VP2-E290基因。

2.根据权利要求1所述的共表达猪瘟病毒T细胞表位与猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌，其特征在于干酪乳杆菌为L.casei 393。

3.如权利要求1所述共表达猪瘟病毒T细胞表位与猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌的制备方法，其特征在于共表达猪瘟病毒T细胞表位与猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌按以下步骤制备：一、以质粒pMel_BacA-VP2-E29为模板、P1和P2为引物PCR扩增VP2-E290基因；二、对扩增得到的VP2-E290基因进行BamHI和XhoI双酶切，然后克隆到分泌表达型载体pPG-2中，得到重组载体质粒pPG-2-VP2-E290；三、用重组载体质粒pPG-2-VP2-E290电转化干酪乳杆菌；四、重组干酪乳杆菌乳糖诱导，即得到共表达猪瘟病毒T细胞表位与猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌。

4.根据权利要求3所述的共表达猪瘟病毒T细胞表位与猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌的制备方法，其特征在于步骤一中引物的基因序列为：

P1：5’-CGATGGGGATCCTATGAAACACAAAGTTCGTAACGAAGTTATGGTTCACTGGTTCGACGACCGCGAG-3’，

P2：5’-AGCTTCTCGAGCCATGCTACCTGATTAACCGAGTAACTG-3’。

5.根据权利要求3所述的共表达猪瘟病毒T细胞表位与猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌的制备方法，其特征在于步骤一中扩增VP2-E290基因的PCR反应体系为50μL：pMel_BacA-VP2-E290模板1μL、Taq DNA聚合酶0.5μL、10×PCR Buffer50μL、浓度为25pmol/μL的引物P1 1μL、浓度为25pmol/μL的引物P2 1μL、dNTP 4μL和去离子水37.5μL；PCR反应条件：95℃预变性5min，94℃变性1min、58.3℃退火1min20s、72℃延伸2min、30个循环，72℃延伸10min。

6.根据权利要求3所述的共表达猪瘟病毒T细胞表位与猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌的制备方法，其特征在于步骤三中电转化的干酪乳杆菌为L.casei 393。

7.根据权利要求3所述的共表达猪瘟病毒T细胞表位与猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌的制备方法，其特征在于步骤四重组干酪乳杆菌乳糖诱导按以下步骤进行：A、将重组干酪乳杆菌接种于Cm浓度为10μg/mL的MRS液体培养基，置于37℃环境中振荡摇床培养过夜；B、按1∶10的体积比将过夜培养液接种于Cm浓度为10μg/mL、乳糖质量浓度为2％、不含Glucose的MRS液体培养基中，置于37℃的环境中诱导20±2h。