[发明专利]一种耐高还原糖浓度的除虫链霉菌菌株筛选方法

权利要求书

1.一种耐高还原糖浓度的除虫链霉菌菌株筛选方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)发酵罐中装入发酵培养基，使其装液量达到65-75％，再加入淀粉酶，121℃灭菌后培养基中还原糖浓度达5.5-7％，然后按培养基体积3-7％的移种量，将除虫链霉菌种子液移种至该发酵罐中，在温度27-29℃，罐压0.04-0.06MPa，转速30-50rpm，通风量1100-1300L/h条件下发酵培养；

(2)发酵100-120小时后，从上述发酵罐中无菌取发酵液，在无菌室中将取样液稀释成10^-2、10^-4、10^-6梯度浓度，然后取不同稀释度的取样液0.1ml各涂布在葡萄糖梯度平板培养基上，取样液每个稀释度在每个葡萄糖梯度下平行涂3个平板，将上述涂布好的平板在温度27-29℃，湿度40-50％条件下倒置培养2-4天；

(3)从上述的平板中挑取菌株生长良好、菌落多的平板，然后从挑选出来的平板中挑取单菌落划线接种至斜面培养基，在温度27.5-28.5℃，湿度40-50％条件下，培养7-9天，再从斜面培养基上挖块接种至种子培养基，在温度27.5-28.5℃下，培养39-41小时后取培养液，按发酵培养基体积3-7％的接种量，接种至发酵培养基，在温度27.5-28.5℃，转速200-300rpm条件下培养230-250小时，然后测定效价，挑选出效价较高的菌株；

(4)将效价较高的菌株划线接种至斜面培养基，温度27.5-28.5℃，湿度40-50％条件下，培养7-9天，再从斜面培养基上挖块接种至种子培养基，在温度27.5-28.5℃下，培养39-41小时后取培养液，按发酵培养基体积3-7％的接种量，接种至发酵培养基，在温度27.5-28.5℃，转速200-300rpm条件下培养230-250小时，然后测定效价，挑选出效价较高的菌株；

(5)将步骤(4)中挑选出的效价较高的菌株进行遗传稳定性考察，即通过斜面培养基传代培养，在温度27.5-28.5℃，湿度40-50％条件下，培养7-9天，得到的各子斜面分别在温度27.5-28.5℃，转速200-300rpm条件下发酵培养230-250小时，然后测定效价，挑选出具有较好遗传稳定性的菌株。

2.如权利要求1所述的一种耐高还原糖浓度的除虫链霉菌菌株筛选方法，其特征在于斜面培养基重量配比为：酵母膏0.1％、麦芽糖0.1％、胰蛋白胨0.2％、琼脂粉2％，葡萄糖2％，余量为蒸馏水，并调pH至7.2。

3.如权利要求1所述的一种耐高还原糖浓度的除虫链霉菌菌株筛选方法，其特征在于所述的葡萄糖梯度平板培养基重量配比为：酵母膏0.1％、麦芽糖0.1％、胰蛋白胨0.2％、琼脂粉2％，葡萄糖控制在2％、3％、4％、5％、6％等5个梯度水平，余量为蒸馏水，并调pH至7.2。

4.如权利要求1所述的一种耐高还原糖浓度的除虫链霉菌菌株筛选方法，其特征在于种子培养基含有：玉米淀粉28-32g/L、玉米浆3-7g/L、酵母膏13-17g/L、KH₂PO₄2-6g/L，余量为蒸馏水，并调PH为7.0-7.2；优选为玉米淀粉30g/L、玉米浆5g/L、酵母膏15g/L、KH₂PO₄4g/L。

5.如权利要求1所述的一种耐高还原糖浓度的除虫链霉菌菌株筛选方法，其特征在于发酵培养基含有：玉米淀粉110-130g/L、酵母粉13-17g/L、豆粕粉3-7g/L、花生饼粉3-7g/L、KH₂PO₄ 3-7g/L，余量为蒸馏水，并调PH为7.0-7.2；优选为玉米淀粉120g/L、酵母粉15g/L、豆粕粉5g/L、花生饼粉5g/L、KH₂PO₄5g/L。

6.如权利要求1所述的一种耐高还原糖浓度的除虫链霉菌菌株筛选方法，其特征在于步骤(1)中除虫链霉菌种子液移种时机为当培养在发酵罐中的菌液pH达到6.3-6.7，菌体浓度达到28-32％，移种量为4-6％，发酵条件为温度27.5-28.5℃，罐压0.05-0.06MPa，转速35-45rpm，通风量1150-1250L/h。