[发明专利]慢病毒-胸苷激酶基因构型及其获得方法和临床应用

权利要求书

1、慢病毒—胸苷激酶基因构型，其特征是：包括慢病毒载体LV、胸苷激酶片断和CMV启动子，全构件核苷酸长8.1Kb，胸苷激酶长1.1Kb、启始片断为18bp；全构件的DAN序列如序列表SEQ ID№：1所示；启始片断的序列为ATGGCTTCGTACCCCGGC。

2、根据权利要求1所述的慢病毒—胸苷激酶基因构型，其特征是：所述慢病毒—胸苷激酶基因构型如图1所示。

3、慢病毒—胸苷激酶基因构型的获得方法，其特征在于包括如下步骤：

1)在序列为ATGGCTTCGTACCCCGGC启始片断的诱导下，将慢病毒载体LV与TK基因cDNA，经酶切、连接、转化使胸苷激酶片断插入慢病毒载体中，构成初级构件；

2)将1)中的初级构件与辅助质粒pLP1、pLP2、pLP/VSVG共转染293T细胞培养扩增，提取培养上清液，80,0000g超速离心分离得到用于治疗的慢病毒—胸苷激酶基因产品。

4、根据权利要求3所述的慢病毒—胸苷激酶基因构型的获得方法，其特征在于：所述TK基因cDNA如序列表SEQ ID№：2所示；其中，红色部分为TK基因序列，起始密码子ATG，终止密码子TGA，GAATTC为EcoR I的酶切位点，CCGCGG为Sac II的酶切位点，CCCGGG为Sam I的酶切位点。

5、根据权利要求3所述的慢病毒—胸苷激酶基因构型的获得方法，其特征在于：为TK基因PCR扩增而设计的引物如序列表SEQ ID№：3所示。

6、根据权利要求3所述的慢病毒—胸苷激酶基因构型的获得方法，其特征在于：用于DNA连接及载体构建过程如图2所示。

7、慢病毒—胸苷激酶基因构型的临床应用，其特征是：利用本发明所述的慢病毒—胸苷激酶基因构件扩增后的上清液制取基因产品，该产品可以制成治疗神经胶质瘤、前列腺癌、黑色素瘤、肝癌、肺癌等实体肿瘤的制剂。

8、如权利要求7所述的慢病毒—胸苷激酶基因构型的临床应用，其特征是：利用慢病毒—胸苷激酶基因构件扩增后的上清液制取基因产品，该产品可以制成治疗神经胶质瘤、前列腺癌、黑色素瘤、肝癌、肺癌等实体肿瘤的制剂。