[发明专利]一种用于培育转基因禽的种蛋孵化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于培育转基因禽的种蛋孵化方法。

背景技术

利用基因工程技术可以将禽类中不利的基因剔除，以提高禽类的抗病抗逆性、提高禽类生产性能和改善肉质。继乳腺生物反应器之后，利用转基因技术将人或动物的抗体基因导入蛋鸡体内，将其改造成输卵管生物反应器，可以使其所产的蛋中含有大量具有经济价值的蛋白质，再用其生产药品和保健品。因此，转基因禽类具有巨大的经济价值和应用前景。

近年来已有不少转基因鸡的研究报告出炉，但是真正可以投入生产的却几乎没有，主要原因之一是转基因禽类的成功孵化比较难实现。

禽类为卵生孵化，其受精卵在体内受精后不久就被蛋清和蛋壳包裹并开始发育，到种蛋产出体外时就已经是有5-6万个细胞的囊胚了，排出的种蛋会在合适的温度湿度等条件下再继续进行发育，所以禽类的转基因不像哺乳类动物那样可以在受精卵单细胞层面上进行显微操作，而大多是对刚产出的种蛋进行囊胚水平上的转基因操作，再使转基因后的种蛋继续孵化培养直至出雏。随之，鸡胚的体外培养体系也建立起来。起初人们将鸡胚放在陶瓷缸、塑料膜中培养，鸡胚最久可以发育到14天，但是没有活的鸡胚出雏；后来发展出代用蛋壳孵化体系，其在体外培养系统中成功获得了出雏的小鸡，但是孵化率较低，主要是因为复杂的体外培养孵化体系并不能很好的满足鸡胚在原蛋壳内的发育要求，再加上其复杂的程序和苛刻的条件，使其推广应用受到限制。

如果要提高转基因鸡的孵化率，最好的方法就是在种蛋原壳中孵化转基因鸡胚。近年来发展出“开窗法”转基因操作种蛋转基因过程，其方法如下：在种蛋原壳的赤道面上开直径0.5-1.0cm的圆窗，透过其对鸡胚X期胚盘进行转基因操作，术后将开口用各种材料(例如胶类、塑料膜、石蜡膜等物质)封闭，使转基因后的鸡胚在种蛋原壳内继续进行孵化。这种称为“开窗法”的操作方法可以成功的获得转基因雏鸡并且孵化率比以往的鸡胚体外培养方法要高。但是与实际需求相比，这种方法的孵化率仍然很低，主要是因为孵化过程中封口后的种蛋普遍出现蛋清外溢的现象，最多可以在一批蛋中100％的出现不同程度的蛋清外溢现象，蛋清的外溢破坏了蛋内水分和营养的平衡，影响了鸡胚的正常发育，并且外溢的蛋清极易滋生细菌，引发细菌的污染，造成鸡胚的死亡。有关研究认为蛋清外溢是由于开窗导致蛋内气压的失衡引起的，所以，又采取封窗前往蛋内添加稀蛋清或是磷酸盐缓冲液的办法来解决，也有采取去掉种蛋钝端部分蛋壳的方法来解决，虽然这样的措施部分降低了蛋清外溢的程度，但是这些方法均操作繁琐，并且也没有在根本上杜绝蛋清外溢的发生。

发明内容

本发明的目的是提供一种孵化种蛋的方法，该方法特别适合应用于转基因禽的培育。

本发明所提供的孵化种蛋的方法，是将蛋壳的赤道上有被封闭的开孔的种蛋，按照使被封闭的开孔朝上并处于所述种蛋的最高处的方式放置，进行静置孵化；至所述种蛋内的绒毛膜发育到包裹种蛋内的全部内容物时，再将所述种蛋大头朝上小头朝下放置，进行翻蛋孵化；然后再进行静置孵化直至出雏。

其中，所述种蛋内的绒毛膜包裹种蛋内的全部内容物时，是指从开始孵化时计起，孵化至第4-5天，优选为第5天。

所述翻蛋孵化共持续12-15天，优选为14天。

所述静置孵化和翻蛋孵化的温度为37-38.5℃，优选为38℃；所述静置孵化和翻蛋孵化的相对湿度为50％-75％，优选为75％。

本发明方法适合于一般禽类种蛋的孵化，如鹌鹑、家鸭和鸡等，而且种蛋的品种不限。

所述种蛋为采取开窗法操作的转基因种蛋。

所述蛋壳的赤道上有被封闭的开孔的种蛋可从商业途径获得，也可按照常规方法(如“开窗法”)制备。

本发明的发明人经过研究发现，开窗法转基因种蛋在孵化过程中出现蛋清外溢的根本原因是蛋清与有机封口物质直接接触造成的。用于封闭开窗的封口膜基本采用的是有机物质，其表面含有许多微小的孔隙，而蛋清是碱性的优良有机溶剂，其中还含有各种各样的酶类物质，在孵化的过程中如果使蛋清与封口膜直接接触，在温暖高湿的孵化环境中，蛋清会渐渐的将封口膜物质溶解，加上孵化时翻蛋造成蛋清流动的反复冲刷，封口膜就会逐渐被溶蚀，其表面的微小孔隙扩大，最终导致蛋清的外溢。

本发明的发明人还发现，开窗法转基因操作中，种蛋赤道上开窗之后，蛋壳内会出现一个微小的空腔(称人工气室)。

本发明的发明人基于以上发现，并结合如下禽类胚胎的发育过程，创造性地提供了一种从根本上克服了蛋清外溢现象的种蛋孵化方法：