[发明专利]用于特异性检测和吸附腹腔疾病和疱疹样皮炎相关抗体的方法和免疫吸附剂

说明书

本发明涉及衍生自麦醇溶蛋白组分的融合肽，用于针对所述肽的 抗体进行诊断检测的测试剂，以及用于将所述抗体免疫吸附从而治疗 腹腔疾病和疱疹样皮炎的方法。

现有技术

摄取含有谷蛋白的谷物产品会对不耐受谷蛋白的患者的小肠黏 膜造成损害(谷蛋白敏感性肠病；婴儿和儿童：腹腔疾病；成人：地 方性口炎性腹泻；在本专利申请中，使用的术语“腹腔疾病”与年龄 无关、并且与谷蛋白敏感性肠病为同义词)。这会引起绒毛萎缩和功 能异常。临床症状主要是腹泻以及导致吸收不良(特别是，体重减轻、 儿童生长迟缓)。一些患有谷蛋白敏感性肠病的病人还会发生疱疹样 皮炎或杜林氏病，其为一种慢性起泡皮肤病，但是这种疾病也可能单 独发生。

诊断谷蛋白敏感性肠病和疱疹样皮炎的重要手段在于分析麦醇 溶蛋白和组织转谷氨酰胺酶的两种不同的抗体。其可确证临床诊断， 并且也非常适合于监测疾病的进展，以及控制无谷蛋白的饮食或谷蛋 白压力测试。从病人的血浆中特异性地分离出这两种抗体也可伴随着 积极的治疗效果。

在谷蛋白敏感性肠病以及疱疹样皮炎的发病活动期，大部分时间 均可以检测到IgA和IgG类的麦醇溶蛋白抗体。偶尔也可以检测到 IgM类抗体，但是其通常只有当存在有IgA和IgG类的麦醇溶蛋白抗 体时才能检测到。

在开始无谷蛋白饮食后，谷蛋白的IgA抗体的水平在两个月内下 降到较低值，而IgG类抗体水平一般保持更长的时间。如果IgA类的 麦醇溶蛋白抗体持续保持高水平，则表明没有遵守无谷蛋白饮食。在 谷蛋白压力复发的情况下，麦醇溶蛋白的IgG类抗体水平在数天内上 升，而IgA抗体水平则稍后上升。

组织转谷氨酰胺酶的生理功能是使细胞外基质蛋白交联，其通过 催化谷氨酰胺残基的γ-羧基酰胺基和赖氨酸残基的ε-氨基之间形成 异肽键而实现(Aeschlimann等.2000 Connective Tissue Res.41：1-27； Gentile等.2002.Neurochem Int.40：79-83)。

从食物中摄取的富含谷氨酰胺的麦醇溶蛋白在重新吸收后也可 能被组织转谷氨酰胺酶所修饰。然而，此时优选的是，谷氨酰胺通过 酶脱氨作用而转化成谷氨酸残基(在文献Schwertz等.2004.Clin Chem.50：2370-2375中有所概述)。这导致麦醇溶蛋白肽更强烈地与 MHC-II类分子结合，并因此增强了对腹腔疾病患者中的T细胞的刺 激(等.1998.Scand J Gastroenterol.48：111-115；Molberg等. 1998.Nat Med.4：713-717)。

脯氨酸-谷氨酸-谷氨酰胺三肽(PEQ)被确定为是针对IgA类抗 体的重要抗原表位，其作为脱氨基的麦醇溶蛋白的一部分时尤其是如 此(Osman等.2000.Clin.Exp.Immunol.121：248-254)。据证明，脱 氨基的麦醇溶蛋白比未修饰的麦醇溶蛋白更特异性被腹腔疾病患者 的抗体所识别(Aleanzi等.2001.Clin.Chem.47：2023-2028)。在腹腔疾 病中，当检测衍生自麦醇溶蛋白的脱氨基肽的抗体以作为腹腔疾病的 指标时，作者确定了其对IgA类抗体的特异度为86.7％、灵敏度为 85.0％，并且对IgG类抗体的特异度为86.7％、灵敏度为90.0％(参 照表1，a)。

在系统地分析腹腔疾病相关性IgA类抗体与合成抗原(其优选衍 生自麦醇溶蛋白)的结合时，两种由SEQ ID NO 2(Pro Leu Gln Pro Glu Gln Pro Phe Pro)和SEQ ID NO 3(Pro Glu Gln Leu Pro Gln Phe Glu Glu)所示序列的九肽被确认为最合适的抗原(Schwertz等.2004 Clin.Chem.50：2370-2375)。这两种肽(根据文献Kramer等.1998.J. Methods Mol.Biol.87：25-39)各自平行地在纤维素膜上被化学合成， 随后其在化学发光试验中直接被用于腹腔疾病相关性抗体的结合。该 方法是在进行抗原表位模拟研究中、在制备基于膜的多肽库时得知 的。用于抗体检测的各种试剂导致制造诊断测试体系的生产成本偏 高。