[发明专利]肿瘤特异嵌合启动子及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种肿瘤特异嵌合启动子，其特征在于：其核苷酸序列如序列表中NO.3 所示。

2.一种肿瘤特异嵌合启动子的构建方法，其特征在于它是由下述步骤组成：

(1)克隆Survivin序列

采用微量基因组DNA极速抽提试剂盒并采用试剂盒相应方法提取人外周血 的基因组DNA，并设计针对Survivin序列的引物，引物序列如下：Survivin P1：

Xho I ACTCGAGCCCGGCCTGCACGCGTTC；

P2：XbaI ATCTAGACGGTTAATGGCGCGCCGC；

通过聚合酶链式反应进行扩增，获得Survivin序列，通过质量浓度为1.0％ 琼脂糖电泳回收、连接、转化以及鉴定获得Survivin序列的阳性克隆，菌种-80℃ 保存，并将相应的载体中量提取DNA保存在-20℃；

(2)构建肿瘤特异性嵌合启动子

将Survivin序列的阳性克隆经酶切、质量浓度为1.0％琼脂糖电泳回收、连 接到一个含有多克隆位点及SV40 poly A的载体中，命名为pEAAL-Survivin， 通过设计合成含有miniCMV序列的linker片段，其DNA序列为：

TCTAGAGTAGGCCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGAT CTCATCGAT；

室温退火4小时，形成含有miniCMV序列的linker片段，并连接到经XbaI 与ClaI酶切后的pEAAL-Survivin载体中，再通过转化、质粒提取以及鉴定，获 得肿瘤特异性嵌合启动子。

3.权利要求1肿瘤特异嵌合启动子在表达小干扰RNA中的用途。

4.权利要求1肿瘤特异嵌合启动子在构建条件复制型腺病毒载体中的用途。