[发明专利]一种深层液体发酵法制备富硒茶树菇粗多糖粉的方法

权利要求书

1、一种深层液体发酵法制备富硒茶树菇粗多糖粉的方法，其特征是将茶树菇子实体通过组织分离法接入固体斜面培养基上培养，待长好后移至摇瓶种子液体培养基中培养，将培养好的种子液接入摇瓶发酵液体培养基培养。在发酵液体培养基中加入一定浓度无机硒，使茶树菇菌丝体中积累高浓度的有机硒，同时发酵液有效成分中也有一定浓度的硒元素。发酵结束后，收集菌丝体，匀浆，热水浸提，浸提液浓缩后醇析，冷冻干燥得到富硒茶树菇胞内粗多糖粉；另外将发酵液浓缩，将浓缩液醇析后冷冻干燥得到富硒茶树菇胞外粗多糖粉；二者合并后得到富硒茶树菇粗多糖粉。步骤为：

(1)菌种培养

出发菌种为市售茶树菇(Agrocybe aegirit)；

①组织分离法

斜面培养基：PDA培养基，含1.5％～2.0％琼脂，pH自然；

组织分离方法：将子实体外表用酒精进行表面消毒后，放入超净工作台上，用消毒过的刀片与镊子切取菌柄与菌盖交界处组织块接入斜面培养基上，pH自然，置于25℃温度下暗培养，5d后菌丝开始萌发，每隔2d检查1次，除去污染，选择菌丝生长速度快和长势强的试管作为纯母种；

②摇瓶种子培养

摇瓶种子培养基：PDA1L加磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，牛肉膏2g，蛋白胨1g，pH6.0；

培养方法：从斜面菌种中取3～4块黄豆大小相同的菌块，接种于摇瓶种子培养基中，250mL三角瓶装培养基100mL于25℃，150r/min，振荡培养7d；

③摇瓶发酵培养

发酵培养基：玉米粉2g/100mL、酵母粉0.3g/100mL、磷酸二氢钾0.2g/100mL、硫酸镁0.05g/100mL、亚硒酸钠4μg/100mL

培养方法：将培养好的种子以15％的接种量接入摇瓶发酵培养基中25℃，150r/min，振荡培养7d；

(2)富硒粗多糖的提取：离心分离收集发酵液和菌丝体；

①胞内粗多糖的提取：将湿菌丝体匀浆，80℃-90℃热水浸提，加水量为4倍体积湿菌丝体，总提取时间为10h，提取3次，合并提取液，浓缩后加入3倍体积95％乙醇在4℃醇析12h，8000rpm离心得沉淀物，沉淀物用蒸馏水复溶后冷冻干燥，粉碎后得到富硒茶树菇胞内粗多糖粉；

②胞外粗多糖提取：将发酵液浓缩后调PH值为5.5，添加4倍体积发酵液的95％乙醇，4℃醇析17h，8000rpm离心得沉淀物，沉淀物用蒸馏水复溶后冷冻干燥，粉碎后得到富硒茶树菇胞外粗多糖粉；

(3)产品的获得：将茶树菇胞内粗多糖粉与茶树菇胞外粗多糖粉合并，得到富硒茶树菇粗多糖粉；