[发明专利]有毒甲藻规模化生产的采收方法

说明书

技术领域

本发明涉及藻类采收领域，具体涉及一种有毒甲藻规模化生产的采收方法。

背景技术

海洋甲藻(dinoflagellate)，又称海洋双鞭藻，是主要的海洋赤潮生物之一，甲藻产生的有毒次生代谢产物，又称甲藻毒素。研究表明，甲藻毒素在开发抗癌、镇痛、麻醉、抗病毒、抗菌等各种治疗药以及作为癌症等药理研究工具药方面有着非常广阔的应用前景。

由于自然环境中有毒甲藻的细胞密度非常低，因而毒素原材料的来源困难制约了毒素的进一步深入研究和应用，目前国际市场上毒素种类较少，价格昂贵。甲藻毒素的分子量往往较大，很难进行仿生有机合成，因此从天然环境中分离有毒甲藻获得纯系进行高密度高毒性的规模化培养，收集有毒甲藻藻泥用于分离提取各种毒素成为目前最为常用的途径。

在有毒甲藻的规模化生产过程中，安全高效完整地采收甲藻细胞，防止细胞破裂造成内容物外泄，是分离提取各种毒素的前提和保证。

有毒甲藻为单细胞，个体大小通常在几十微米，最小的只有几微米，绝大多数种类具有由许多小甲片组成的细胞壁，其生活方式为游动的单细胞或由单细胞连成各种形状的群体。海洋中能产生毒素的甲藻约有45-60种，但迄今能够实现人工规模化培养的只有寥寥数种。甲藻的种类不同，生活方式不同，采收方法也不同。

中国专利200510034502提供了一种单细胞藻类的采收方法，该方法是收集单细胞藻类的培养原液并进行粗滤，利用超滤浓缩设备循环过滤，得到所需浓度的单细胞藻类浓缩剂，浓缩后液再进行常规处理，该方法虽然可以实现单细胞藻类的采收，但是过滤步骤复杂，对多个工艺条件需要控制，而且采收过程中需要过滤器等仪器，还需要清洗过滤器。

本发明人之前申请的中国专利03146858给出单细胞有毒甲藻的一个种类-Amphidinium klebsii的纯种分离途径，其中提到用对Amphidinium klebsii的采集方法是先向藻液中加入浓度为0.2～0.35质量‰的絮凝剂[KA1(SO4)₂·12H2O]，甲藻细胞沉淀后通过逐级浓缩再用滤膜过滤多余水分收集藻泥。

本发明通过继续研究发现，虽然上述利用絮凝剂沉淀单细胞生活的有毒甲藻，用滤膜过滤收集得到藻泥用于提取各种毒素，不失为一种有效的方法，但由于有毒甲藻不同的种类细胞大小不同，活动能力不同，所需的絮凝剂用量也不同，若絮凝剂用量过小则甲藻细胞不能沉淀或不能完全沉淀，而用量过大则容易造成细胞破裂内容物外泄，既污染环境又达不到提取毒素的目的；而且，逐级浓缩后滤膜过滤收集藻泥只适用于水体较小的室内养殖，当养殖规模较大时滤膜容易堵塞，需要经常收集清理就显得既费时费力又麻烦。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种适合于大规模产业化生产的，可用于采收多种单细胞甲藻种类，且规模化生产过程中能保证安全、高效、无细胞破损的有毒甲藻的采收方法。

本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的：

本发明人通过对有毒甲藻规模化生产的采收方法进行试验摸索，结果发现将絮凝剂的使用和离心方法结合起来，可实现发明目的，絮凝剂的加入能够沉淀单细胞生活的有毒甲藻细胞，然后再采用离心方法则可以获得藻泥。絮凝剂和离心方法的结合既可以避免单独使用絮凝剂易导致用量过大，细胞破裂造成内容物甲藻毒素外泄的问题，又解决了规模化生产中单独使用离心法收集的高投资高能耗问题，而且离心方法的运用实现了规模化生产时大批量的采收。

本发明的有毒甲藻规模化生产的采收方法，其包括如下步骤：

(1)向有毒甲藻藻液中加入絮凝剂KA1(SO₄)₂·12H₂O至KA1(SO₄)₂·12H₂O的终浓度为0.2～0.35‰；

(2)静置1～2小时后，除去上清水体，收集沉淀液；

(3)将上述沉淀液离心后，弃去上清液，底部沉淀即为所需藻泥，收集该藻泥保存即可。

上述步骤(1)中，有毒甲藻的收集一般选择在甲藻生长至收获期时进行。

上述步骤(1)中，向藻液中加入絮凝剂的时候，可以边加边搅拌，使藻细胞充分絮凝沉淀。

上述步骤(2)中，将加有絮凝剂的有毒甲藻藻液静置，在静置过程中可用显微镜镜检上层水体，当上层水体中基本无甲藻细胞检出时，排去上清水体，收集沉淀液；如有必要还可以重复步骤(2)。