[发明专利]一种染料木素和大豆黄素单体的分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种染料木素和大豆黄素单体的分离方法，尤其是涉及一种大豆异黄酮中的染料木素和大豆黄素单体的分离方法，属于天然药物的分离、纯化技术领域。

背景技术

研究表明：染料木素(别名染料木黄酮，英文名Genistein)具有雌性激素及抗雌激素性质，在体内能抑制结肠癌、乳腺癌、皮肤癌、前列腺癌等，对多种肿瘤细胞株有抑制作用；具有抗氧化作用，可以预防绝经后骨质疏松；具有诱发细胞程序性死亡、提高抗癌药效、抑制血管生成等作用，是一种很有潜力的癌症化学预防剂，其抗癌作用及机制具有广泛的应用前景。大豆黄素(别名大豆黄酮，英文名Daidzein)有雌激素样作用，有明显的抗缺氧作用，且大豆黄素对免疫系统的促进作用及抗溶血能力均强于染料木素。染料木素和大豆黄素的相对雌激素作用强度分别为3.1和0.26，染料木素和大豆黄素对子宫雌激素受体的结合强度分别为0.49％和0.027％。

染料木素和大豆黄素都属于异黄酮类物质，是大豆异黄酮的主要活性成份。目前，大豆异黄酮的主要获取方式是以大豆为原料，通过不同溶剂的预处理方法，结合微波提取技术等，提取大豆异黄酮粗品，然后通过超滤和大孔吸附树脂柱、层析柱等对所得粗品进行精馏提纯，最后利用层析法和/或高效液相色谱法进行各单体分离。现有分离方法不仅操作复杂，分离成本高，关键是要得到高纯度单体须经过多次分离操作才有可能得到微量的样品，分离效率低，很难推广到工业化实施。因此，研究一种操作简单、分离成本低、效率高及分离的单体纯度高，可工业化实施的染料木素和大豆黄素单体的分离方法，对深入研究其药理作用、机制及其的推广应用具有十分重要的理论意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简单、分离成本低、效率高及分离的单体纯度高，可工业化实施的染料木素和大豆黄素单体的分离方法，以克服上述现有技术所存在的缺陷。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明的染料木素和大豆黄素单体的分离方法，是以30nm的多孔聚碳酸酯(PC)膜为模板材料，采用化学沉积法制备直径为10nm左右的金纳米通道膜，然后利用对巯基苯胺(PATP)通过金-硫共价键自组装到金纳米通道孔壁上，形成致密单层氨基末端的金纳米通道膜(PATP-Au-Mem)，由于PATP-Au-Mem末端氨基在较低pH值条件下易被质子化而使金纳米通道膜荷正电，对荷正电的过膜物具有静电荷斥力作用，因此本发明再利用铝与染料木素形成正电荷螯合物，使其不易透过PATP-Au-Mem膜，及大豆黄素单体不能与铝形成螯合物而易透过PATP-Au-Mem膜，从而达到高效选择性分离染料木素与大豆黄素单体的目的。

所述分离方法的具体操作如下：

a)制备金纳米通道膜

将30nm的多孔聚碳酸酯(PC)膜浸入无水甲醇中，超声震荡，以洗去基膜上吸附的杂质并将膜活化；将清洗后的PC膜依次在浓度为20～30mM的SnCl₂溶液中浸泡0.5～1小时→取出用水清洗后在浓度为25～35mM的Ag(NH₃)₂⁺溶液中浸泡10～20分钟→取出用水清洗后在甲醇中浸泡5～10分钟→取出在浓度为5～10mM、pH＝10的亚硫酸金钠沉积溶液中，在1～4℃下化学镀金5～6小时→取出用水清洗后再用浓度为25％的HNO₃水溶液浸洗10～12小时，即得到直径为8～12nm的金纳米通道膜；

b)修饰金纳米通道膜

首先将所制得的金纳米通道膜在piranha溶液[30％H₂O₂∶98％H₂SO₄＝3∶7(v/v)]中浸泡5～10分钟，然后取出用水清洗，浸入浓度为10～30mM的对巯基苯胺(PATP)乙醇溶液中浸泡10～12小时，最后将膜取出用甲醇清洗、氮气吹干即可；

c)制备铝的螯合物

首先将染料木素与大豆黄素的混合物溶于甲醇-磷酸缓冲溶液(v/v＝1∶1)中，配制成染料木素的浓度为0.5～1mM的待分离溶液；然后在NaCl调节溶液离子强度的作用下，向待分离溶液中加入浓度为0.025～0.1M的AlCl₃水溶液，在室温下搅拌5～10分钟即可，其中AlCl₃与染料木素的摩尔比为50∶1～100∶1；

d)分离