[发明专利]灯盏花提取物中灯盏花乙素的吸附树脂法分离工艺

说明书

【技术领域】：

本发明属于天然植物中单体活性成分的分离纯化技术领域。特别是灯盏花素提取物中两种结构极为相近的单体成分——灯盏花乙素和灯盏花甲素的吸附分离工艺，以及分离过程中所使用的高选择性吸附树脂的合成方法。

【背景技术】：

灯盏花，为菊科飞蓬属植物短葶飞蓬Erigeron breviscapus(Vant.)Hand.Mazz.的干燥全草，又名灯盏细辛、地顶草等，主要分布于我国西南地区的云南、广西等省。灯盏花乙素(Scutellarin)是灯盏花提取物中的主要黄酮类活性成分，对心、脑、肝、肾等具有明显的保护作用。以灯盏花提取物为原料药的各种制剂已被临床广泛应用，如高血压、冠心病、心肌梗塞、肝炎、糖尿病、肾病等疾病的治疗，但是临床应用中个别患者也出现了冷热反应、皮肤瘙痒等过敏反应，另外其注射剂在使用中也表现出稳定性差、储存时间短等缺陷，这都与制剂中仍含有一定量的杂质有关。因此，为了达到更为严格的质量控制、减少药物使用过程中无法预期的毒副反应，高纯度灯盏花乙素的制备变得尤为重要。目前，市售的灯盏花提取物(又称灯盏花素)中，灯盏花乙素约占85％左右，此外还包括10％左右的灯盏花甲素(Apigenin-7-O-glucuronide)及其它少量杂质，作为原料药的灯盏花素提取物中灯盏花乙素含量也仅为90％。研究表明，灯盏花素中的药效成分为灯盏花乙素，因此灯盏花甲素也作为无效的杂质应予以去除，但是，灯盏花乙素和甲素结构极为相近(如下图所示)，造成二者难以分离，分离成本大大提高。

Scutellarin                             Apigenin-7-O-glucuronide

在灯盏花素提取纯化的传统方法中，溶剂萃取法仍是工业化生产中有效、成熟的方法(王淑红等，加速溶剂萃取法用于灯盏细辛中灯盏乙素的测定[J]，药物分析杂志，2006，26(5)：703)。但是溶剂萃取法的缺陷也显而易见，一方面在提取纯化过程常需溶剂反复萃取，不仅步骤繁杂，生产成本高，更重要的是经常在大量开放环境中使用甲醇、四氢呋喃等低沸点、有毒的有机溶剂，损害操作人员的健康且环境污染严重；另一方面，溶剂萃取法制备的灯盏花素提取物中，灯盏花乙素纯度较低(纯度低于85％)，且难以去除与灯盏花乙素结构极为相近的灯盏花甲素，因此，目前市售的灯盏花素原料药常为灯盏花乙素和灯盏花甲素的混合物。

近年来，吸附分离技术因其操作简便、环境友好、生产成本低、纯化效率高等优势越来越广泛的用于天然植物有效成分的分离纯化中。但是由于商品化的吸附树脂骨架仍以聚苯乙烯为主，结构单一，吸附机理也以疏水性吸附为主，这都造成吸附分离方法选择性相对较差。在灯盏花素的提取纯化中，大孔吸附树脂更多的是作为含量较低的有效成分的富集材料，难以真正完成去除杂质，制备高纯度提取物的要求，例如楼云雁等探讨了利用商品化的聚苯乙烯型大孔树脂纯化灯盏花素的可行性，研究表明，这些树脂可有效的去除部分杂质，但是难以制备高纯度的灯盏花乙素(楼云雁等，静态吸附法选择纯化灯盏花素的大孔树脂[J]，中医药学刊，2006，24(6)：1129)。张人伟等公开了一项中国发明专利，使用商品化的AB-8和D101大孔聚苯乙烯型吸附树脂为分离材料，用于市售灯盏花素原料药的进一步纯化，得到纯度为90％左右的灯盏花乙素，但是在专利所公开的纯化工艺中，只经树脂“吸附-解吸”一步过程得到的解吸液中，灯盏花乙素的纯度难以达到要求，仍需将解吸液调节pH值以使其中的灯盏花素以沉淀的形式析出而达到进一步纯化的目的，因此，操作工艺难以实现连续化，且较高酸性(pH＝1～2)会破坏灯盏花素的结构稳定性。更为重要的是，虽然经过树脂吸附、析出沉淀两步处理后，去除了大量杂质，使得灯盏花乙素的纯度从80％提高到90％，但是由于AB-8或D101树脂的吸附选择性较差，难以实现结构相近的灯盏花甲素和乙素的分离，因此利用专利公开的分离工艺，无法得到纯度更高的、且不含灯盏花甲素的灯盏花乙素样品(张人伟等，用大孔树脂精制灯盏花素原料药的制备方法，申请号200710065713.6，公开号CN101037461A)。

【发明内容】：

本发明目的是克服现有技术存在的上述不足，提供一种灯盏花提取物中灯盏花乙素的吸附树脂法分离工艺。