[发明专利]猪繁殖与呼吸综合症合成肽疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种用于猪繁殖与呼吸综合症合成肽疫苗的多肽，其中所述多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4、所示的氨基酸序列。

2.一种猪繁殖与呼吸综合症合成肽疫苗，其中包括一种或多种权利要求1所述的多肽。

3.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗包含佐剂。

4.一种权利要求1所述多肽的制备方法，其中包括以下步骤：

(1)去保护反应：在体积比为15％-30％的六氢吡啶的N-甲基吡咯烷酮溶液中，在20-28℃条件下反应25-40分钟，脱除树脂氨基上的9-芴甲氧羰基保护基团，氮气吹干，N-甲基吡咯烷酮洗涤；

(2)氨基酸的活化：将合成用的带有9-芴甲氧羰基保护基团的各个氨基酸与1-羟基苯丙三唑反应合成氨基酸-1-羟基苯丙三唑酯；

(3)缩合反应：使用多肽合成仪将上述各种氨基酸和树脂以及二异丙基碳二亚胺自动加至反应器中，在20-28℃条件下反应0.5-2.5小时，氮气吹干，N-甲基吡咯烷酮洗涤树脂；

(4)乙酰化反应：使用重量体积比为1.5％-4％的乙酰咪唑的N-甲基吡咯烷酮溶液与步骤(3)中获得的树脂在20-28℃条件下反应20-40分钟，氮气吹干，甲醇洗涤树脂；

(5)合成过程由C端至N端，依照氨基酸序列不断的重复步骤(1)～(4)，反应完成后，用N-甲基吡咯烷酮清洗，得到干燥的多肽树脂；

(6)多肽与树脂的分离：向干燥的多肽树脂中加入裂解试剂，匀速搅拌1-4小时后置于0℃下反应10分钟，恢复至室温，挥去三氟乙酸，将叔丁基甲醚及二乙醚加入多肽溶液，搅拌洗涤，过滤得多肽溶液；

(7)超滤纯化多肽及无菌处理：使用膜包在20-28℃条件下超滤多肽，使用0.22微米在线滤器除菌保存。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述裂解试剂的组分体积比为三氟乙酸∶三异丙基硅烷∶乙二硫醇∶苯酚∶水＝85∶8∶3∶3∶1。

6.一种权利要求2或3所述疫苗的制备方法，其中包括以下步骤：

(1)用注射用水将多肽稀释至200μg/ml制得抗原水相；

(2)在20-28℃条件下，按照抗原水相∶佐剂＝1∶1的体积比，先将佐剂加入乳化罐内，90-150转/分钟慢速搅拌1.5-3分钟；

(3)缓慢加入抗原水相，搅拌20-30分钟；

(4)高速搅拌15-30分钟后静置5分钟，分装后即得。

7.根据权利要求6所述的疫苗的制备方法，其特征在于，所述高速搅拌为8000-10000转/分钟。

8.根据权利要求1所述的多肽、权利要求2或3所述的疫苗在制备治疗和/或预防猪繁殖与呼吸综合症的药物中的用途。