[发明专利]一种检测TB抗体的磁性免疫层析试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种检测TB抗体的磁性免疫层析试纸条，其特征在于：该试纸条是将包被膜、结合了TB抗原的磁颗粒垫、样品垫、吸水垫依次相互交错2mm地粘贴在底板上，然后在上层覆盖透明塑料密封膜组装而成，其中所述的包被膜上预包被有TB抗原检测线和质控线。

2.根据权利要求1所述的检测TB抗体的磁性免疫层析试纸条，其特征在于：采用双抗原夹心的反应模式检测TB抗体。

3.根据权利要求1所述的检测TB抗体的磁性免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)抗原的处理：选用基因工程技术制备的商品化TB重组配对抗原，对20mM，pH7.0-7.6的PBS 4℃透析过夜；

2)包被膜的制备：使用0.02mM，pH7.0-7.6的PBS，分别将TB包被抗原和羊抗兔IgG稀释到0.5-1.5mg/ml的浓度，使用定量喷液装置分别将二者以0.5-1.2cm的间隔喷印于硝酸纤维素膜上，晾干后于封闭液中浸泡10分钟后于25-35℃烘干8小时，加入干燥剂封存备用；

3)磁颗粒垫的制备：将TB抗原及兔IgG对0.02M，pH7.0-7.6的PBS 4℃透析过夜，调整浓度为2mg/ml；选用直径为100-300nm的超顺磁颗粒，使用含有0.1％Tween-20的50mM，pH4.5-5.0的醋酸钠缓冲液洗涤磁颗粒，加入碳二亚胺使终浓度为20mmol/L，室温反应1小时，使用含有0.1％Tween-20的50mM，pH4.5-5.0的醋酸钠缓冲液充分洗涤磁颗粒后加入TB抗原使TB抗原与磁颗粒的分子比例为5∶1(摩尔比)，室温反应3小时，加入含有0.5％BSA的0.02M，pH7.0-7.6的PBS室温封闭30分钟，使用含有0.1％Tween-20的50mM，pH4.5-5.0的醋酸钠缓冲液洗涤磁颗粒，然后使用含有1％PVP，1％casein，0.5％Tween-20，5％蔗糖的50mM，pH8.2-9.0的硼酸保存缓冲液复溶磁颗粒，4℃保存备用，使用同样的方法将兔IgG偶联于磁颗粒上；将TB抗原偶联的磁颗粒和兔IgG偶联的磁颗粒以2∶1的比例混合，充分混匀后使用保存缓冲液以1∶5-1∶20的比例(体积比)将混合物稀释待喷涂玻璃纤维垫使用；将稀释好的磁颗粒使用定量喷膜装置以10-50μl/cm的量均匀喷涂于玻璃纤维上，冷冻干燥后加入干燥剂封存备用；

4)样品垫的处理：将样品垫放入样品垫处理溶液中浸泡处理1小时后取出25-35℃烘干8小时；所述的样品垫处理液是含有0.5％-2.5％BSA和0.1％-1％的聚乙烯醇，以及0.01-0.2％吐温-20的0.02M，pH7.0-7.6的磷酸盐缓冲溶液；

5)试纸条的组装：在透明塑料底板上依次相互交错2mm贴上包被膜、磁颗粒垫、样品垫、吸水垫，然后在上层覆盖透明塑料密封膜得到试纸板，根据要求的宽度切割即得到试纸条。