[发明专利]胰岛素样分泌细胞的制备法及所用的组合培养基

权利要求书

1、一种组合培养基，其特征是：由分别独立的培养基I、培养基II和培养基III组成；

培养基I为：DMEM高糖培养基，1-2％胎牛血清，9-11ng/ml碱性成纤维细胞生长因子，1％二甲基亚砜和17-25mmol/l葡萄糖；

培养基II为：无血清DMEM/F12培养基，15-19mmol/l葡萄糖，9-11mmol/l尼克酰胺，18-22ng/ml表皮生长因子，18-22ng/ml碱性成纤维细胞生长因子，10nmol/lexendin-4，1％B27添加剂和1％N2添加剂；

培养基III为：RPMI 1640培养基，10-12mmol/l葡萄糖，9-11mmol/l尼克酰胺，9-11mmol/l4-羟乙基哌嗪乙磺酸，90-110pmol/l肝细胞生长因子，1.5-2.5nmol/l激活素A和9-11nmol/lexendin-4。

2、如权利要求1所述的组合培养基的用途：将hBM-MSCs转化成胰岛素样分泌细胞。

3、利用权利要求1所述的组合培养基进行的胰岛素样分泌细胞制备法，其特征是：采用3-5代hBM-MSCs，包括以下步骤：

1)、以培养基I重悬所述3-5代hBM-MSCs，然后以2-3×10⁴个细胞/cm²密度接种于6孔板，于37℃、5％CO₂的环境，接种时间为65～80小时；

2)、将上述接种后所得的细胞用磷酸缓冲液洗涤，将洗涤后的细胞放入培养基II中于37℃、5％CO₂环境下孵育140～160小时；

3)、去除步骤2)所得物中的培养基II，然后加入培养基III，于37℃、5％CO₂环境孵育110～130小时，得胰岛素样分泌细胞。