[发明专利]一种利用序列标签定量测定核酸的方法无效
申请号: | 200910126690.4 | 申请日: | 2009-03-09 |
公开(公告)号: | CN101519698A | 公开(公告)日: | 2009-09-02 |
发明(设计)人: | 周国华 | 申请(专利权)人: | 周国华 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
代理公司: | 南京天华专利代理有限责任公司 | 代理人: | 夏 平;刘成群 |
地址: | 210002江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 利用 序列 标签 定量 测定 核酸 方法 | ||
1.一种利用序列标签技术定量测定核酸的方法,包括下列步骤:连接反应标记待 测核酸、扩增反应增加连接反应产物量、测序反应识别和定量连接反应产物上的序列标 签,其特征在于单管中含有一对或多对连接探针,每对连接探针与一种待测核酸存在特 异性互补序列,该对连接探针中的至少一条探针含有特异性的序列标签;
其中:
序列标签是指具有不同碱基序列的DNA片段;
连接反应是指在连接酶的作用下与同一种待测核酸的序列发生互补的一对相邻的 连接探针发生的反应:
连接探针一端含有一段与待测核酸模板互补的序列,另一端含有一段与待测核酸模 板不互补的序列;
与待测核酸模板不互补的序列在不含有序列标签的探针中包括一段PCR引物特异 性序列,还可以包含一段内切酶特异性位点序列;与待测核酸模板不互补的序列在含有 序列标签的探针中包括一段PCR引物特异性序列和标签序列,还可以包含一段内切酶 特异性位点序列;
一对相邻的连接探针是指两条探针与同一种待测核酸分子杂交后,其中一条连接探 针的3’端和另一条连接探针的5’端紧密相邻;
测序反应是指基于生物发光反应测定引物延伸产生的焦磷酸盐的测序技术。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于连接反应是指在单管中多对相邻的连接 探针同时发生的连接反应。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于内切酶是指IIS型内切酶;PCR引物是 指用于扩增与多种核酸对应的连接产物的共用引物。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于测序反应是指采用dNTP进行的测序反 应,或者是采用ddNTP进行的测序反应。
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