[发明专利]一种利用序列标签定量测定核酸的方法无效

专利信息
申请号: 200910126690.4 申请日: 2009-03-09
公开(公告)号: CN101519698A 公开(公告)日: 2009-09-02
发明(设计)人: 周国华 申请(专利权)人: 周国华
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68
代理公司: 南京天华专利代理有限责任公司 代理人: 夏 平;刘成群
地址: 210002江*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 利用 序列 标签 定量 测定 核酸 方法
【说明书】:

技术领域

发明属于分子遗传领域,涉及一种利用序列标签定量测定核酸的方法。

背景技术

核酸定量分析就是定量测定特定序列核酸的相对含量,基因序列差异和基因表达量 差异分析的实质就是定量测定核酸模板。

基因序列的差异主要包括单核苷酸多态性(SNP)、序列重复(copy number variation, CNV)和序列缺失,其中单核苷酸多态性是指基因组DNA中某一特定核苷酸位置上发 生转换、颠换、插入或缺失等变化。基因序列重复和缺失指一段基因的部分序列、一种 基因的某个外显子序列、某种基因的全部序列、甚至整个一组染色体序列的重复或缺失。 基因表达量差异检测是指比较同一基因转录产物mRNA在不同细胞、不同脏器组织、 不同生理状态下的分布状态和存在量的差异,是进行基因功能解析的重要途径。可以根 据测定结果推定未知基因的功能、解明基因间及蛋白质间的相互作用。

提高分析通量(即一次可以测定的样本数或待测靶标的数)可以减低检测成本和提 高检测效率,而提高方法的多重检测能力又是提高分析通量的重要手段。通常借助生物 分子的多元标记技术来实现多重并行检测。生物分子常用的标记技术为荧光标记。采用 不同颜色的荧光染料可以同时标记多个待测靶标分子,受荧光物质种类和荧光检测波长 范围的限制,目前至多可以同时用四种荧光探针进行标记(1),而通常仅用两种荧光染料 分别标记一份内参和待测样本。为了解决高通量分析方面的不足,发展了编码技术。一 种是常用的芯片点阵编码技术(2),即将编码探针通过微阵列固定在芯片表面,然后再进 行芯片扫描检测;第二种方法是基于混合染料光谱学特征的编码技术(3,4),即先用两种颜 色的荧光染料按照不同的比例混合制备系列编码微球载体,并在微球表面固定不同的探 针,然后根据不同波长处检测到的荧光强度比值对待测微球进行解码;第三种方法是基 于量子点的编码方法(5,6),即将不同粒径的量子点按不同比例包埋在聚合物中,得到不同 编码的微球,并在其表面修饰DNA探针(7,8)。采用分子量不同的有机分子也可以编码不 同的核酸分子,但需要质谱技术解码,该方法不仅繁琐而且费时、费力,检测时需要通 过化学反应释放出标记物才能检测。

目前缺少一种简单、方便、通量高、成本较低、且既能用于测定基因序列差异又能 用于测定基因相对表达量的方法。

参考文献:

1.Vet,J.A.,Van der Rijt,B.J.and Blom,H.J.(2002)Molecular beacons:colorful analysis of nucleic acids.Expert review of molecular diagnostics,2,77-86.

2.Duggan,D.J.,Bittner,M.,Chen,Y.,Meltzer,P.and Trent,J.M.(1999)Expression profiling using cDNA microarrays.Nat Genet,21,10-14.

3.Schmitt,M.,Bravo,I.G.,Snijders,P.J.,Gissmann,L.,Pawlita,M.and Waterboer,T.(2006) Bead-based multiplex genotyping of human papillomaviruses.J Clin Microbiol,44,504-512.

4.Yang,L.,Tran,D.K.and Wang,X.(2001)BADGE,Beads Array for the Detection of Gene Expression,a high-throughput diagnostic bioassay.Genome Res,11,1888-1898.

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