[发明专利]抗人CD45RA鼠免疫球蛋白可变区基因及用途

说明书

技术领域

本发明属生物技术，主要涉及抗人CD45RA鼠免疫球蛋白ZCH-6-3A4(简称3A4)(单克隆抗体或单抗)可变区基因及其在制备治疗血液系统恶性肿瘤靶向药物中的用途。

背景技术

血液系统恶性肿瘤是严重危害人类健康的疾病，早在20世纪70年代前，白血病被认为是不治之症，其病死率几乎是100％。随着世界各国对白血病诊疗的深入研究，新的抗肿瘤药物的不断问世和造血干细胞移植的实施，白血病的预后已经有了明显的改善。但严重的毒副作用仍然是临床成功治疗白血病的主要障碍，且复发耐药的病例缺乏药物选择，给治疗带来了极大的困难。

近年来随着分子生物学及抗体工程技术的进步，只杀伤肿瘤细胞而不损伤正常细胞的白血病靶向治疗得到了广泛的关注和发展，其中单克隆抗体(单抗)导向的靶向治疗是该领域的主要方向。与化疗比较，单克隆抗体靶向治疗具有良好的选择性和特异性，它们只杀伤表达靶分子的细胞，而不损伤无靶分子表达的血细胞成分和组织器官细胞，从而可大大提高靶向治疗的特异性，降低药物的全身毒副作用。有效的靶向治疗取决于良好的先导分子，系列特异性表面分化抗原单抗作为先导分子，将药物或毒素特异地带到肿瘤细胞膜上或细胞内，或通过完整抗体激活补体(CDC)或通过抗体介导细胞毒(ADCC)作用以达到杀灭白血病细胞的目的，有着无可替代的优势。Rituximab(商品名：美罗华)是美国FDA批准用于肿瘤治疗的第一个单抗药物，是一种非结合型人鼠嵌合型CD20单抗，其作用靶点是CD20抗原，主要在前B细胞和成熟B细胞上表达，95％以上B系非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)病例淋巴瘤细胞上呈高表达，在成人B系NHL及CD20+的ALL治疗中取得令人满意的疗效。在靶向药物的研究中，为了提高靶向药物对靶细胞的选择性杀伤，减少对非靶向组织的毒副作用，确定一个特异性强的单抗是首要问题。

CD45是白细胞共同抗原，CD45分子三个外显子A、B、C或称4、5、6的可变剪接产生了多种变构体，CD45在白细胞表面广泛表达，而在其它实体组织细胞上不表达，这最大限度地避免了大多数化疗药物能造成多器官损伤的副作用^[1]。目前国际上已经采用放射性核素标记的CD45抗体用于造血干细胞移植前的预处理。Glatting G利用¹¹¹In标记的抗CD45单抗YAML568预处理8名骨髓移植患者，生物学分布检测表明红骨髓中的浓度明显高于脾脏、肝脏、肾脏等重要组织，在对骨髓产生明显抑制的同时，机体其它重要脏器功能无明显受损^[2]。John M在临床I期试验中发现，46位AML患者在HLA配型外周血干细胞移植前预处理方案中采用¹³¹I-BC8鳌合白消安和环磷酰胺，达到了较理想的骨髓清除，结果显示患者移植排斥反应减轻，移植后存活率提高，与509名预处理中使用无放射免疫标记白消安和环磷酰胺AML移植患者比较，前者的总体死亡率为后者的0.65^[3]。但是，普通CD45抗体不能常规用于一般靶向治疗白血病，因为，其与造血组织的反应性过于广泛，特别是其在所有T、B、粒细胞、单核细胞、NK细胞、DC细胞表面均有表达，常规应用能产生严重的细胞免疫缺陷或嗜中性粒细胞缺乏^[4]。

CD45RA是CD45分子的一种变构体，在初始T细胞、B细胞、部分粒细胞、部分单核细胞表面表达，而在活化T细胞、成熟红细胞和血小板及机体实质器官组织细胞上不表达。CD45RA仅与未刺激过的T细胞亚群(T)反应，而对已经受过抗原刺激并使机体对已接触过的抗原建立了免疫活性的记忆T细胞亚群(CD45RO+)细胞不反应，因此，采用CD45RA作为分子靶向杀伤或治疗时，应该不会破坏机体业已建立的细胞免疫功能，而受CD45RA抗体清除的T细胞虽会暂时失去对新病原体(如病毒)的免疫反应，但是，待治疗结束后，正常造血干细胞能产生后备的T细胞可以弥补这种暂时性细胞免疫功能低下。至于B细胞上有CD45RA高表达，这与CD20抗体类似，可以通过输注丙种球蛋白来弥补暂时的体液免疫功能缺陷。另外，CD45RA在红细胞和血小板上不表达，不会产生贫血和血小板减少。因此，CD45RA应该是一种较为理想的靶向杀伤白血病细胞的靶点。但是目前国内外尚无针对该抗原靶向治疗的系统研究。