[发明专利]用异硫氰酸荧光素标记的抗人CD45RA单抗的应用

说明书

技术领域

本发明属生物技术，主要涉及鼠免疫球蛋白，尤其涉及用异硫氰酸荧光素 (FITC)直接标记的抗人CD45RA鼠免疫球蛋白单抗[克隆名：ZCH(Zhejiang Children’s Hospital)-6-3A4]在制备白细胞和白血病干细胞检测试剂中的应用。

背景技术

人类白细胞分化抗原(cluster of differentiation，简称CD分子)是位于细 胞表面的糖蛋白或者糖脂分子，通过与组织基质、细胞因子及其它细胞的相互 作用发挥机体正常的免疫功能。而针对CD分子的抗体是分析CD分子结构、 功能和分布不可或缺的有力工具。CD分子抗体已经广泛地应用于血液学、免 疫学、病理学等领域的研究。随着多色流式细胞仪(flow cytometry，FCM)技 术的日新月异，利用FCM结合CD类抗体可以实现对大部分血液系统疾病快 速而准确地诊断和鉴别诊断，同时以单克隆抗体为导向分子的靶向药物的研究 也取得了令人鼓舞的成就。因此，CD分子及其单抗成为诸多学者研究的热点， 从1982年巴黎的第1届国际人类白细胞分化抗原工作组会议(1^st International Workshop and Conference on Human Leukocyte Differentiation Antigens，HLDA1) 开始，至2004年澳大利亚阿德莱德召开的第8届HLDA8会议，已有339种 CD分子被鉴定和命名。

血液系统恶性肿瘤疾病的治疗方案与预后判断中，疾病的类型是重要因 素，及时而准确地对疾病进行诊断和分型是有效治疗的前提条件。利用FCM 技术和CD分子，白血病的免疫分型和鉴别诊断较以往更为准确、快速^[1]。而 在血液系统恶性肿瘤治疗中，随着抗肿瘤药物的不断问世和造血干细胞移植的 实施，白血病的预后已经有了明显的改善。虽然白血病的诊断和治疗已经有了 明显的进步，复发和耐药仍然是白血病治疗中难以攻克的难题。已有越来越多 的临床和实验研究资料显示，白血病患者体内存在着一群比例极少的白血病干 细胞(Leukemia stem cells，LSCs)，在启动白血病发生和发展中起着决定性 的作用，被认为是白血病耐药和复发的根源，细胞毒性药物可以杀死大部分的 白血病细胞，骨髓常规甚至流式细胞仪均不能检测到白血病细胞。但是此时病 人体内仍可能存在白血病干细胞，后者是白血病细胞中极微量的一群细胞，往 往处于细胞周期之外(G0期)，不能被常规的细胞毒性药物杀死，成为复发 的根源。从理论上讲，如果能够捕获并彻底清除白血病干细胞，白血病就能被 彻底治愈。Bonnet等通过对大量临床样本的研究发现，急性髓细胞白血病 (Acute myeloid leukemia，AML)中CD34+CD38-细胞亚群具有长期增殖能力， 该类亚群虽然在AML患者中所占的比例很少(约0.12％)，但它们却可将人类 AML转移至非肥胖型糖尿病/严重联合免疫缺陷病(NOD/SCID)小鼠的唯一 细胞，这些白血病细胞被称为“白血病干细胞”。应用白血病干细胞移植于 NOD/SCID小鼠的实验显示，大部分的AML亚型(除急性早幼粒细胞白血病 M3外)的白血病细胞均表达CD34+CD38-或者CD34+CD38+/low表型^[2]。而 CD123表达于白血病干细胞但不表达于正常造血干细胞^[3]。Dean等进一步研究 表明由CD34+CD38-CD123+标记的白血病干细胞96％处于细胞分裂周期的 G0期，处于静止期的LSC避免受到常规细胞周期特异性药物的攻击^[4，5]。因此， CD34+CD38-CD123+是比较公认的髓系白血病干细胞的标志。如果能够识别 此类细胞群对于白血病的诊断、治疗和预后判断都是极为重要的。

发明内容

本发明的目的是提供一种用异硫氰酸荧光素(FITC)直接标记的抗人 CD45RA鼠免疫球蛋白单克隆抗体[克隆名：ZCH-6-3A4，该克隆名为本研究 室自行命名，已经第7国际人类白细胞分化抗原协作组会议(HLDA7)鉴定并 命名]在制备白细胞和白血病干细胞检测试剂中的应用。研究表明，CD45RA 鼠免疫球蛋白单克隆抗体能够有效识别白血病病人骨髓细胞及白血病细胞株 中的CD34+CD38-CD123+白血病干细胞及CD34+CD38+CD123+的子代白血 病细胞。