[发明专利]用于提高汉坦病毒融合蛋白G2S0.7表达的腺病毒高表达载体

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及分子生物学、免疫学及免疫应用等相关 领域。本发明涉及腺病毒重组转移载体的改建及其对肾综合征出血热 (HFRS)致病原——汉坦病毒(HV)的嵌合基因G2S0.7的表达。

背景技术

肾综合征出血热及其基因工程疫苗研究现状：

肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)是由 汉坦病毒(Hantavirus，HV)引起，由鼠类等传播的一种急性病毒性传染病， 临床上以发热、出血和急性肾功能损害为主要特征。中国是世界上HFRS疫 情最严重的国家，具有流行范围广、发病人数多、病死率高等特点，到目前 为止临床上尚缺乏特异有效的治疗药物。

为易感人群接种疫苗是预防传染性疾病大规模流行的最有效措施。因 此，针对HFRS疫苗的研究一直是该领域的热点。国内外近年来虽已研制出 HFRS的灭活疫苗，但从部分人群试用的情况来看，该类疫苗还存在明显不 足，主要是其诱导机体产生中和抗体的能力较弱，也不能有效地刺激细胞免 疫应答。目前在HFRS基因工程疫苗基础研究中主要使用的是病毒囊膜糖蛋 白(Glycoprotein，GP)，但GP免疫原性相对较弱，刺激机体产生的抗体出 现较晚，滴度亦不高。本发明人多年对HV中免疫原性最强的核蛋白 (Nucleocapsid Protein，NP)的结构及功能，NP与GP不同片段嵌合基因 (G1S0.7、G2S0.7)的构建及其表达，以及不同融合基因(蛋白)刺激机体 免疫应答的能力及其影响因素等进行了较为深入的研究。一系列体内、外实 验结果表明，上述嵌合基因在腺病毒表达系统中能有效地刺激机体的体液免 疫(包括中和抗体)应答以及细胞免疫应答，且其效果均高于非嵌合组。

然而在研究中我们也发现了一些问题，如尽管利用各种系统均能表达出 完整的融合蛋白，但总的来说蛋白表达量还是偏低。此外，用融合蛋白免疫 动物后虽然各表达系统均能刺激机体产生体液及细胞免疫应答，且腺病毒表 达系统的效果要优于其他系统，但是整体的免疫水平还不十分理想。因此， 进一步选择合适的表达载体、优化表达系统对目前HFRS基因工程疫苗的研 究有着重要的意义。

表达载体的优化：