[实用新型]检测青霉素的免疫胶体金试剂板

说明书

技术领域

本实用新型属于兽药残留免疫化学快速检测技术领域，具体涉及一种检测试剂板。

背景技术

青霉素类抗生素是β-内酰胺类中一大类抗生素的总称，因为价廉、方便、低毒、高效等特点，被广泛应用于实际生产。青霉素广泛应用于治疗奶牛疾病、促进奶牛生长、降低发病率、提高饲料利用率，带来乳业增产的同时，也不可避免的造成了原料奶抗生素残留问题，最终导致青霉素在人体内的残留。由此可引起过敏反应，造成人体内环境平衡的紊乱和菌群失调，同时在进行药物治疗时会产生耐药性，另外青霉素残留会导致牛乳的发酵不能正常完成，对乳品生产企业造成巨大经济损失，对进出口贸易造成一定影响。我国农业部第235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》中规定青霉素G和普鲁卡因青霉素在奶类中残留限量标准为4μg/kg。

目前，对于青霉素类药物残留的检测方法主要有理化分析法和免疫分析法。理化分析法，如HPLC及LC-MS，具有特异性好、准确率高的特点，是各大检测机构对检测样本进行确证的首选方法，但存在对设备、环境、操作技能等要求，不利于大规模样本筛选，因而不适合广大基层部门。免疫分析法，如酶联免疫吸附法(ELISA)，具有检测量大，操作相对简单等优点，越来越多地被用于动物性食品中抗生素残留的检测，但是ELISA法整个操作时间仍需要1-2h，且需用到特殊仪器设备，具有一定局限性。

实用新型内容

本实用新型的目的在于针对上述方法的不足，提供一种灵敏度高、操作简单、检测时间短、不需要特殊仪器设备、生产成本低的原奶中青霉素残留免疫胶体金快速检测试剂板。

本实用新型试剂板由上下两块塑料模板、背衬及粘附在背衬上依次紧密相连的样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫组成。

其中样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫相邻各部分间有1-2mm的重叠，其目的一方面是保证层析作用从样品垫到吸水垫部位顺利进行，另一方面是为了使样品溶液与样品垫有充分反应时间，样品垫上的缓冲体系可以中和样品溶液的酸碱度，保证样品溶液中的有效成分与胶体金结合垫上的金标抗体顺利发生反应。

胶体金结合垫上包被有抗青霉素单克隆抗体与胶体金的结合物；硝酸纤维素膜上从样品垫到吸水垫方向依次包被有青霉素G-载体蛋白偶联物和羊抗鼠IgG，分别作为检测线和质控线。偶联青霉素G的载体蛋白可为牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、血蓝蛋白(KLH)等。抗青霉素单克隆抗体为可以识别青霉素G、氨苄青霉素和羟氨苄青霉素的免疫球蛋白或其片段。

本实用新型所描述的试剂板的各部分组成成分与功能如下：

塑料模板，起固定试纸条及标示功能区(加样孔、检测区、控制区)的作用

背衬为一面涂有不干胶的不吸水的韧性材料，如PVC板，起固定支持试纸其他组成部分的作用。

样品垫由玻璃纤维制成，起吸收样品溶液与缓冲样品溶液pH值的作用。

胶体金结合垫由聚酯膜制成，其上标记有抗青霉素单克隆抗体与胶体金的结合物，是样品溶液中的有效成分与金标抗体发生反应的场所。

硝酸纤维素膜部分主要作用是将反应结果以肉眼可见的颜色表征出来。

吸水垫为滤纸，作为吸水部分其作用是将移动上来的多余的溶液吸收。

本实用新型试剂板具有如下有益效果：

(1)特异性好。本实用新型试剂板对青霉素类药物中的青霉素G、氨苄青霉素及羟氨苄青霉素的交叉反应率分别为100％、70％及60％，对其他种类的抗生素包括氯霉素、喹诺酮类、四环素类、庆大霉素、链霉素、磺胺类药物等无交叉反应，可见，本实用新型对青霉素类药物反应均有高度专一性。

(2)灵敏度高。本实用新型试剂板对原奶中青霉素G的检出限为4μg/kg，可以满足我国农业部第235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》中对青霉素G和普鲁卡因青霉素在奶类中最高残留限量4μg/kg的规定要求。

(3)操作简单快捷，不依赖任何实验设备，不需任何专业培训。本实用新型试剂板将反应所需的大部分原理整合到试剂条中，滴样后抗原抗体反应在固相膜上快速进行，大大缩短了检样时间，且样品无需特殊处理，滴样后3-5分钟内即可用肉眼通过判断硝酸纤维素膜上的检测线和质控线的颜色深浅读取结果，检测过程无需特殊仪器辅助，普通人员均可操作，不需要专业培训，极易推广使用。

(4)成本低，效益好。本实用新型试剂板生产工艺成熟、流程简单，生产成本低廉，投资少，收效快。

附图说明