[发明专利]病毒纯化方法有效
| 申请号： | 200980146845.9 | 申请日： | 2009-09-24 |
| 公开（公告）号： | CN102215865A | 公开（公告）日： | 2011-10-12 |
| 发明（设计）人： | M·汤普森;J·威;A·纳格帕尔 | 申请（专利权）人： | 米迪缪尼有限公司 |
| 主分类号： | A61K39/155 | 分类号： | A61K39/155;C12N7/02 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 韦东 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 病毒 纯化 方法 | ||
1.一种从病毒感染细胞纯化呼吸道合胞病毒的方法，其特征在于，所述方法包括：
a)澄清病毒收获物以形成澄清的病毒收获物，其中澄清包括：
i.采用孔径在约3微米到约10微米之间的至少一个澄清过滤器通过直流过滤(DFF)过滤病毒收获物；
ii.用非特异性内切核酸酶处理病毒收获物；
iii.采用孔径在约0.45微米到约3微米之间的至少一个澄清过滤器通过DFF过滤病毒收获物；
b)用包含蔗糖、磷酸盐或含盐(NaCl或KCl)Tris的稳定缓冲液稳定澄清的病毒收获物，以形成稳定的病毒收获物；
c.采用分子量截留值(MWCO)为500kDa-0.1μm的中空纤维筒通过切向流过滤(TFF)浓缩稳定的病毒收获物并通过渗滤(DF)进行缓冲液交换，以形成浓缩的病毒收获物；
d)采用孔径在约0.8微米到约0.45微米之间的至少一个澄清过滤器通过DFF过滤浓缩的病毒收获物；
其中呼吸道合胞病毒从病毒感染细胞纯化，其最终病毒感染性效价为至少5.7log10FFU/mL。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括通过离子交换色谱进行纯化的步骤。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(c)的交换缓冲液包含约(10-25％w/v)蔗糖、约150mM-10mM磷酸钾和约175mM-50mM KCl，pH 7.0-7.4。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述呼吸道合胞病毒是(rA2cp248/404/1030ΔSH)。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，用包含约150mM-50mM磷酸钾、约250mM-175mM蔗糖和约175mM-125mM NaCl或KCl，pH7.0-7.4的缓冲液稳定所述病毒收获物。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(c)产生5X浓缩，且交换至少5体积倍数的缓冲液。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述非特异性核酸酶与病毒收获物接触约120分钟到210分钟。
8.通过权利要求1所述方法产生的呼吸道合胞病毒。
9.一种免疫原性组合物，其包含通过权利要求1所述方法产生的呼吸道合胞病毒的多肽。
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