[发明专利]兔抗人MARVELD1多肽多克隆抗体及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生命科学，具体说就是一种兔抗人MARVELD1多肽多克隆抗体及其制备方法。 

背景技术

MARVELD1基因最初从人肺上皮细胞中分离得到的，研究发现其参与了细胞微丝的组装调控，而且在多种组织中表达。该基因曾被命名为P18基因，且根据其参与了微丝组装和细胞粘附的特性申请了专利(专利号：ZL200610009776.5)。进一步的研究发现MARVELD1在多种肿瘤中表达下调，且参与了细胞对紫外线辐射耐受的响应性表达。目前关于MARVELD1蛋白的抗体尚无商业化产品，限制了对MARVELD1蛋白生物学功能的深入分析。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性好、纯度高、可与细胞内源性的MARVELD1蛋白发生特异性结合反应的兔抗人MARVELD1多肽多克隆抗体及其制备方法。 

本发明的目的是这样实现的：所述的MARVELD1多肽的氨基酸序列为：ProProProArgGlnProProProGlnAlaArgAlaAlaArgCys。 

所述的兔抗人MARVELD1多肽多克隆抗体的制备方法，步骤如下： 

步骤一：经DNAStar软件分析后，确定MARVELD1蛋白N末端4-17位14个氨基酸作为其抗原表位，在多肽羧基末端附加一半胱氨酸；最终确定多肽的氨基酸序列为： 

ProProProArgGlnProProProGlnAlaArgAlaAlaArgCys； 

步骤二：用多肽自动合成仪合成MARVELD1多肽，纯化后与载体蛋白KLH偶联，形成MARVELD1多肽-KLH复合蛋白； 

步骤三：将乳化后的MARVELD1多肽-KLH在兔背部皮下注射，共进行四次免疫； 

步骤四：收集、分离得到含有兔抗人MARVELD1多肽抗体的血清； 

步骤五：将MARVELD1多肽与溴化氰活化的Sepharose 4B偶联，制备多肽亲和层析柱； 

步骤六：将含有兔抗人MARVELD1多肽抗体的血清加入到步骤五制备的层 析柱中，放置于4℃孵育过夜后，洗脱抗体，即得到抗人MARVELD1多肽抗体。 

本发明还有以下技术特征： 

(1)所述的MARVELD1多肽的纯化，采用HPLC对其进行纯化，使MARVELD1多肽的纯度达到95％以上。 

(2)所述的免疫次数为四次。 

(3)采用免疫亲和纯化的方式对兔抗人MARVELD1多肽多克隆抗体进行纯化。 

(4)所述的兔抗人MARVELD1多肽多克隆抗体，效价在1∶50000以上。 

本发明制备的抗MARVELD1多克隆抗体具有特异性好、纯度高的特点，可与细胞内源性的MARVELD1蛋白发生特异性结合反应，可用于免疫组化、免疫印迹等实验的要求，用于建立体外免疫分析。本发明兔抗人MARVELD1多肽多克隆抗体的制备，为深入研究MARVELD1蛋白的生物学功能和肿瘤诊断提供了一个重要的工具，具有重要的理论意义和临床价值。 

附图说明

图1为本发明采用DNAStar 7.0软件对MARVELD1蛋白序列的分析结果图；包括抗原指数分析和表面可能区； 

图2为本发明的HPLC分析MARVELD1抗原肽的纯度图；图中：各峰面积计算得出目标多肽的纯度为95.6％； 

图3为本发明的兔抗人MARVELD1抗体效价测定的结果图；设定样品OD450值为空白对照OD450值的2倍以上为有效稀释度，据此测得兔抗MARVELD1多肽多克隆抗体的最大效价为1∶512000； 

图4为本发明的免疫杂交检测兔抗MARVELD1多肽多克隆抗体的特异性结果图；图中：1道为转染对照空载体的细胞裂解液，2道为转染pcDNA3.1/V5-His-TOPO-MARVELD1重组体的细胞裂解液，箭头所示为MARVELD1-V5融合蛋白条带。 

具体实施方式

下面结合附图举例对本发明作进一步说明。 

实施例1：结合图1-图4，本发明一种兔抗人MARVELD1多肽多克隆抗体 及其制备方法，所述的MARVELD1多肽的氨基酸序列为： 

ProProProArgGlnProProProGlnAlaArgAlaAlaArgCys。