[发明专利]一种氧化型低密度脂蛋白的制备方法及应用技术

权利要求书

1.一种氧化型低密度脂蛋白的制备方法，其特征是：它包括提取正常人血清，经高速离心机离心，去除上层乳糜微粒后调节密度，超速离心机离心两次，取上层低密度脂蛋白，琼脂糖凝胶电泳鉴定，然后催化氧化得到氧化型低密度脂蛋白，经琼脂糖凝胶电泳及MDA试剂盒测氧化值，BCA法测定蛋白浓度。

2.根据权利要求1所述的一种氧化型低密度脂蛋白的制备方法，其特征是：所述的催化氧化为用硫酸铜催化氧化，浓度为1～10μmol·L^-1。

3.根据权利要求1所述的一种氧化型低密度脂蛋白的制备方法，其特征是：所述的BCA法测定蛋白浓度是将大鼠分离的心肌细胞分别培养在90个培养皿中(每皿含培养液2mL)，培养密度为2×10⁵个心肌细胞/皿，随机选30个培养皿为空白对照组(其中加入相应体积的PBS缓冲液使低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白终浓度为0μg·mL^-1)，分别孵育0h、6h、12h、24h、48h；再选30皿为低密度脂蛋白对照组(加入低密度脂蛋白使其终浓度为120μg·mL^-1)，分别孵育0h、6h、12h、24h、48h；其余30皿为实验组(加入氧化型低密度脂蛋白使其终浓度为120μg·mL^-1)，分别孵育0h、6h、12h、24h、48h，用ELISA法检测细胞培养液上清中TGF-β1和bFGF浓度，留取细胞培养上清，在3000转/min下离心10min后冻存于-80℃，用ELISA试剂盒检测各组培养液中的TGF-β1、bFGF浓度。。

4.一种权利要求1所述的氧化型低密度脂蛋白的应用技术，其特征是：将PBS缓冲液、低密度脂蛋白及氧化型低密度脂蛋白经大鼠尾静脉注入其血管内，每天注射一次，空白对照组中注射相应体积的PBS缓冲液，实验组注射氧化型低密度脂蛋白(血浆中终浓度为40μg·mL^-1)，低密度脂蛋白对照组中注射相同浓度的低密度脂蛋白。分别于第1、7、14、21及28天，在麻醉状态下取出实验大鼠心脏，用冰冻生理盐水冲洗干净，取心室肌放入4％多聚甲醛中固定，常规石蜡包埋，切片厚度为5μm，每个石蜡块取10张切片进行Masson染色，普通光镜观察形态学改变，图像采用Image pro plus 6.0图像分析处理软件手动计算绿色纤维和红色胶原的面积，计算胶原容积分数，用ELISA法检测血浆中P I CP浓度，分别于第1、7、14、21及28天采血，在3000转/min下离心10min后得到血浆，-80℃冻存，用ELISA试剂盒检测血浆P I CP浓度。