[发明专利]东方百合种质资源离体保存方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组培快繁与种质资源保存技术领域，尤其涉及一种延长东 方百合种质的离体保存方法。

背景技术

东方百合(Oriental hybrid lily)为多年生观赏植物，主要用于切花栽培，近 年我国百合切花生产量年增长达20％以上。由于东方百合植株形态优美，切花品 质优良，较抗灰霉病，对光周期不敏感，鳞茎耐冷贮性良好等特性，在我国又 可以利用不同纬度和海拔的气候差异，结合设施栽培实现百合切花的周年生产， 生产效益较高，故具有很好的市场开发前景。目前我国的东方百合种球主要依 赖国外进口，限制国内百合种球生产发展的瓶颈因子是缺乏优良新品种的培育， 其中种质资源的收集、保存和利用工作滞后，使育种原始资源材料溃泛，是目 前影响我国百合新品种选育进程的重要因素之一。百合的传统繁殖和保存方法 是采用鳞片扦插繁育，每年进行田间种植，需消耗大量的人力、物力和财力， 而且鳞茎本身很容易感染镰刀菌、丝核菌和腐霉菌等真菌性病害，且易传播包 括百合无症病毒在内的数种病毒病，通过多年的无性繁殖很容易造成真菌、病 毒等病虫害蔓延，造成资源的丢失与退化，这给百合种质资源的利用和保存带 来巨大损失。

当前，植物种质资源的保存方法主要有田间种植保存，离体低温或超低温 保存，组织培养离体保存等方法。其中，离体保存因不受外界环境条件的影响， 具有田间生长保存无法比拟的优点。有关植物离体保存技术已有不少报导，如 专利ZL200710164732.4报导了一种通过减少培养基中大量元素，添加甘露醇和 青霉素进行彩色马蹄莲种质离体保存方法，CN200710019345.1和 CN200710019346.6分别报导了通过添加脱落酸和减少培养基中大量元素进行菊 花离体保存的方法，发明名称为“石斛属培养物的离体保存方法”(申请号 200810058045.9)报道了通过降低MS浓度，在15～20℃条件下进行石斛试管苗离 体保存的方法。发明名称为“一种营养繁殖花卉石蒜的超低温保存方法”介绍 了超低温方式对植物进行离体保存的方法，如彩色马蹄莲种质离体保存期可达 12个月，菊花离体保存期达10个月。

上述专利涉及的彩色马蹄莲、菊花和石斛均采用具有叶片的组培苗进行保 存，但简单的运用以上方法并不适用于东方百合的种质保存；而石蒜的超低温 保存方法具有需要严格的保存设备条件和保存后的恢复培养难度较大等缺陷。 因为东方百合的鳞茎生长有其特殊性，如其鳞茎底盘切口部位易产生愈伤组织， 如方法不当极易造成鳞茎组织的坏死而影响长期培养的保存效果；且普通的离 体保存方法均在20±2℃和光照条件下进行，会导致百合鳞茎芽的外层鳞片分化 出叶片，生长一段时间后会出现老化和枯死的现象，但如采用13～15℃或5～10℃ 更低的温度培养时，则又会使试管鳞茎解除休眠而诱导顶芽的分化和出叶，造 成试管鳞茎瓶内抽茎和叶片再次发生的现象，上述现象均不利于鳞茎养分的积 累和长期保存的目的。目前，尚未见有关于东方百合种质资源离体保存方面的 报导。

发明内容

本发明目的是，针对现有百合种质资源离体保存方法中所存在的鳞茎组织 易坏死，和外层鳞片易分化出叶、老化、枯死及不利于鳞茎养分积累、保存期 限短等的缺陷，提出一种保存种性质量好，保存期长、且可自行调节、延长， 成本低廉，操作简便，适于东方百合种质资源离体保存的方法。

本发明目的通过以下技术方案来实现：

东方百合种质资源离体保存方法，该方法按如下步骤进行：

(1)培养基的配制：包括基本培养基和离体保存各阶段培养基的组分与各 组分在每升培养基内所含重量为：

a)基本培养基：其中，

诱导培养基为蔗糖30～50g/L，琼脂粉4～5g/L，pH5.6～5.8的MS培养基；

增殖培养基为蔗糖50～60g/L，琼脂粉4～5g/L，pH5.6～5.8的3/5MS培养基；

离体保存与试管鳞茎膨大同步培养基为蔗糖60～75g/L，琼脂粉4.0～5.0g/L， pH5.6～6.0的1/2MS培养基；

b)诱导培养基I：MS+6-BA 1.0～2.0mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L+AC 1.0～3.0mg/L；

c)诱导培养基II：MS+6-BA 0.5～1.0mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L；