[发明专利]一种核酸测序方法

权利要求书

1.一种核酸测序方法，其特征在于：所述核酸测序方法包括以下步骤：

1)目的核酸片段进行PCR扩增；

2)对步骤1)所得到的PCR扩增产物进行纯化；

3)对步骤2)所得到的纯化后的PCR扩增产物进行测序PCR扩增；

4)对步骤3)所得到的测序PCR扩增产物进行纯化，其具体实现方式是：

4.1)将测序PCR扩增产物全量、磁珠8～12ul、85％酒精40～50ul充分混匀后置于空磁力架上2～10分钟；

4.2)弃掉上清液；

4.3)加入80～200ul85％酒精进行清洗，并弃掉上清液；

4.4)空气中干燥1～10分钟；

5)上机读取序列分析结果，其具体实现方式是：加入15～25ul 0.1mM EDTA后导入测序读板中，上机读取结果。

2.根据权利要求1所述的核酸测序方法，其特征在于：所述步骤4.1)中测序PCR扩增产物全量、磁珠9～11ul、85％酒精40～45ul充分混匀后置于空磁力架上2～5分钟。

3.根据权利要求2所述的核酸测序方法，其特征在于：所述步骤4.1)中测序PCR扩增产物全量、磁珠10ul、85％酒精42ul充分混匀后置于空磁力架上3分钟。

4.根据权利要求1或2或3所述的核酸测序方法，其特征在于：所述磁珠是CleanSEQ磁珠；所述磁力架是SPRI96磁力架。

5.根据权利要求4所述的核酸测序方法，其特征在于：所述步骤2)的具体实现方式是：对步骤1)所得到的PCR扩增产物以虾碱酶加碱性磷酸酶进行纯化，其具体实现方式是：

取PCR扩增产物全量、虾碱酶加碱性磷酸酶0.125-0.5ul、ddH2O 1.5ul充分混匀后离心，虾碱酶加碱性磷酸酶作用反应条件：37℃30分钟；80℃15分钟；15℃储存。

6.根据权利要求5所述的核酸测序方法，其特征在于：所述步骤2)中虾碱酶与碱性磷酸酶的比例为1∶3。

7.根据权利要求6所述的核酸测序方法，其特征在于：所述步骤1)的具体实现方式是：

1.1)取DNA1-20ng、正向扩增引物2.5pmol、反向扩增引物2.5pmol、HotStartTaq MasterMix 5ul、ddH2O 3.9ul充分混匀后离心；

1.2)将步骤1.1)所得到的混合液进行PCR反应，PCR反应条件：95℃15分钟；95℃30秒、50-60℃30秒、72℃1分钟，35循环；72℃3分钟；15℃储存。