[发明专利]H5亚型禽流感病毒变异株的多重PCR检测方法

权利要求书

1.一种H5亚型禽流感病毒变异株的多重PCR检测方法，其特征是从待检禽的气管或泄殖腔试子或血液或器官组织或尿囊液中提取全基因组RNA，再以RNA为模板，以AIV基质蛋白(M)、血凝素(H5)基因为靶基因设计型特异性引物、亚型特异性引物和鉴定变异株的引物进行RT-PCR扩增，PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，然后根据电泳结果进行判定；

M1     5′-ATTGGGACTCATCCTAACTCTA-3′

M2     5′-CGTCAACATCCACAGCACTC-3′

HA1    5′-ATRCCATTYCACAACATACACC-3′

HA2    5′-TCCYTGCCATCCTCCCTC-3′

HA3    5′-TAATACATACCCACCAATAAAGGTGA-3′

HA2    5′-TCCYTGCCATCCTCCCTC-3′

其中，R为A或G；Y为C或T。

2.根据权利要求1所述的H5亚型禽流感病毒变异株的多重PCR检测方法，其特征在于：是用灭菌的PBS将所提取的样本研磨成1∶5稀释的混悬液，再用Trizol法提取全基因组RNA。

3.根据权利要求1所述的H5亚型禽流感病毒变异株的多重PCR检测方法，其特征在于：电泳出现300bp的型特异条带的是A型流感毒株；出现173bp的亚型特异条带的是H5亚型流感病毒，出现559bp特异条带的是变异株。