[发明专利]快速检测麻痹性贝毒的免疫胶体金试纸条及其制法

说明书

技术领域：

本发明涉及检测赤潮毒素的检测器具，特别是涉及一种麻痹性贝毒(ParalyticShellfish Poisoning，PSP)的快速检测试纸条，另外还涉及其制法。

背景技术：

赤潮灾害日益严重，已成为一种全球性的海洋生态灾害。麻痹性贝毒(ParalyticShellfish Poisoning，PSP)是我国近岸海域最常见的赤潮生物毒素或贝毒之一，在近岸海域贝类体内经常检出。Alexandrium tamarense等多种藻可以产生麻痹性贝毒。麻痹性贝毒(PSP)是一类具有四氢嘌呤结构的化合物，呈碱性，易溶于水，在弱酸和低温条件下比较稳定，碱性条件下发生氧化。现已发现此类化合物有20多种，根据R4基团的不同可以分为四类，分别是①胺基甲酸酯类毒素(Carbamate toxins)，包括石房蛤毒素(Saxitoxin，STX)，新石房蛤毒素(neosaxiton，neoSTX)，膝沟藻毒素GTX1、GTX2、GTX3、GTX4；②N-磺酰胺甲酰基类毒素(N-sulfocarbamoyl toxins)，包括GTX5(B1)、GTX6(B2)、C1、C2、C3和C4；③脱胺甲酰基类毒素(decarbamoyl toxins)，包括dcSTX、dcneoSTX、dcGTX1、dcGTX2、dcGTX3、dcGTX4；④脱氧胺甲酰基类毒素(deoxydecarbamoyl toxins)，包括doSTX、doGTX1doGTX2。在这些化合物中，STX、neoSTX、GTX1、GTX2、GTX3、GTX4的毒性较大；dcSTX、dcneoSTX、dcGTX1、dcGTX2、dcGTX3、dcGTX4毒性较小；GTX5(B1)、GTX6(B2)、C1、C2、C3和C4毒性最小。麻痹性贝毒在全世界沿海都有分布，因赤潮生物种类及其地理分布不同，主要成分也不同，在温带海域最常见的毒素是GTX2、GTX3和STX，我国南方海域麻痹性赤潮毒素组份与此相似。麻痹性贝毒可在滤食性贝类体内大量积累，贝类被人类食用后，会导致中毒，使人四肢面部肌肉麻痹、头痛恶心，甚至窒息死亡。这类毒素主要作用于神经细胞和肌肉细胞的钠离子通道，阻断钠离子内流，妨碍动作电位的形成，因此表现出神经中毒的特征。麻痹性贝毒是危害最大的海洋生物毒素，因此目前极受关注。目前国际上普遍使用的麻痹性贝毒分析方法是生物小鼠法，用盐酸在高温下提取藻类或贝体中的麻痹性毒素，然后对小鼠进行腹腔注射，根据小鼠的死亡时间判断毒性大小。小鼠法简便易行，适合于大规模、批量样品的检测，该法的缺点是不能区别毒素的种类和结构、干扰大、不精确。现在被广泛接受且较为完善的高效液相色谱衍生荧光分析方法在许多国家使用，可以准确分析确定毒素的含量和结构，检测限可低至ng/g，缺点是样品前处理繁琐费时，仪器昂贵，对操作人员的技术要求较高，严重的阻碍了这种分析方法的普及推广，更无法实现现场检测。免疫化学方法是利用抗体对抗原的特异性结合建立的分析方法，具有灵敏度高，特异性强，仪器设备简单易操作、样品前处理相对简单等优点，适用于一定条件下的现场监测和大量样本快速筛查；目前德国、日本等公司生产的ELISA检测PSP的试剂盒，是以竞争性酶联免疫反应为检测原理，检测全过程需2-4小时，可一次检测多个样品，即可定性又可定量，但存在假阳性问题；由于ELISA是一种很敏感的技术，分析结果的变异性较大，不同分析人员的结果有差异，结果判断往往需要有经验的操作人员，容易发生误检和漏检，同时麻痹性贝毒组分化学结构较多，各异构体之间也存在一定的抗原性差异，且检测时间也比较长，实现真正的野外现场操作有困难。

近年来，我国每年均有在贝中检测出麻痹性贝毒的报道，而且时有中毒甚至死亡的事件发生，已严重影响了贝类出口贸易，引起了各级政府及研究领域的极大关注。建立麻痹性贝毒的快速灵敏准确的检测方法和产品，对确保海产品食用安全和维持水产养殖经济健康可持续发展具有十分重要的意义。

发明内容：

本发明的目的是克服上述麻痹性贝毒检测技术的不足，提供一种特异、敏感和简便的快速检测麻痹性贝毒的免疫胶体金试纸条；研制灵敏的抗麻痹性贝毒抗体，用胶体金标记抗体，通过竞争免疫反应，快速检测贝类中的麻痹性贝毒；简单易操作，快速，不需任何其他仪器设备，非专业人员可现场使用，产品性能稳定。