[发明专利]预防鸭病毒性肝炎的灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于兽医生物制品技术领域，具体涉及预防鸭病毒性肝炎的灭活疫苗(细胞苗)及其制备方法。

背景技术

我国是世界上第一水禽生产大国，具有得天独厚的水域、地理资源优势。养鸭业是我国水禽养殖业的重要组成部分，在我国的农业经济中占有着非常重要的地位，然而鸭病的肆虐不但制约着我国养殖业向规模化、集约化方向的迈进，而且影响着我国禽类产品的进出口等国际化多边贸易的发展，同时会给国家和地区带来巨大的社会、经济和人类生命财产损失。鸭病毒性肝炎是鸭群的常见疾病，对雏鸭有着较大的危害。鸭病毒性肝炎的防控直接影响着我国养鸭业的发展，一直以来都是我国畜牧业生产所关注的重中之重。

鸭病毒性肝炎(Duck virus hepatitis，DVH)是由鸭甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus，DHAV)引起的一种雏鸭的急性高度致死性传染病，主要侵害4周以内的雏鸭，特别是1周以下的雏鸭最易感染，死亡率较高。鸭病毒性肝炎为小RNA病毒科Avihepatovirus病毒属，无囊膜不分节段的正链RNA病毒，无血凝性，对酸、热有较强抵抗力。该病毒RNA全长7729～7799，只有一个开放阅读框，翻译产生一个含2254aa的多聚蛋白。因DHAV抗原性差异，DHAV可分为三个基因型，分别为DHAV-1，DHAV-2(Taiwan)和DHAV-3(Korea)，三个亚型之间无血清学交叉反应，目前在我国流行的主要为DHAV-1和DHAV-2。

目前鸭病毒性肝炎在世界多数养鸭国家均有发生和流行，我国许多养鸭的省市均有该病的流行。对鸭病毒性肝炎的防控中，目前疫苗己研制成三种：氢氧化铝DHV鸡胚化弱毒苗(组织苗)、氢氧化铝DHV鸡胚化弱毒灭活苗(组织苗)及氢氧化铝DHV鸡胚化强毒灭活苗(组织苗)。从病原入手，进一步研究分子致病机理和病毒变异机理，开发相应疫苗是防控该病的关键。

发明内容

本发明的目的是提供一种预防鸭病毒性肝炎的灭活疫苗及其制备方法。

本发明提供了鸭甲型肝炎病毒1型(Duck hepatitis A virus type 1)DHAV-SD株，CGMCC No.3746。鸭甲型肝炎病毒1型DHAV-SD株CGMCC No.3746是2009年4月，刘文军、周远成在山东省潍坊市鸭场的发病鸭体内分离获得的一株鸭病毒性肝炎I型病毒(DHAV-1)，已于2010年4月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCCNo.3746。

鸭甲型肝炎病毒1型又称鸭肝炎病毒1型。

本发明保护鸭甲型肝炎病毒1型DHAV-SD株CGMCC No.3746在制备1型鸭病毒性肝炎疫苗(细胞苗)中的应用。

本发明还保护将鸭甲型肝炎病毒1型DHAV-SD株CGMCC No.3746灭活得到的1型鸭病毒性肝炎疫苗(细胞苗)。

本发明还保护一种制备DHAV-SD株病毒液的方法，包括如下步骤：将鸭甲型肝炎病毒1型DHAV-SD株CGMCC No.3746在宿主细胞中进行培养后破碎细胞，得到的上清即为病毒液；所述宿主细胞为BHK21细胞或DF-1细胞。

所述将鸭甲型肝炎病毒1型DHAV-SD株CGMCC No.3746在宿主细胞中进行培养后破碎细胞，收集上清液的方法可包括如下步骤：

①将鸭甲型肝炎病毒1型DHAV-SD株CGMCC No.3746接种所述宿主细胞，进行培养后通过冻融破碎细胞，收取上清，即为生产用种毒；②将生产用种毒接种所述宿主细胞，进行培养后通过冻融破碎细胞，收取上清，即为制苗用种毒；③将制苗用种毒接种所述宿主细胞，进行培养后通过冻融破碎细胞，收集上清液。

所述步骤①、步骤②和步骤③中：接种所述宿主细胞时MOI均可为0.001，培养时间均可为48～72小时；所述步骤①、步骤②和步骤③中：培养时间优选为48小时；所述步骤③中，可通过5000rpm(Thermo legend RT离心机，角转子#3332)离心30～40min收集上清液。

所述宿主细胞为BHK21细胞时，在所述接种前可先进行如下扩增培养：