[发明专利]一种凡纳滨对虾fx151微卫星DNA标记鉴定fx151遗传变异图谱的方法

权利要求书

1.一种凡纳滨对虾fx151微卫星DNA标记鉴定fx151遗传变异图谱的方法，其特征在于包括以下步骤：先提取凡纳滨对虾基因组并稀释备用，再利用凡纳滨对虾fx151微卫星DNA核心序列(TTGC)n, 其中n=5-10，在其序列两端设计特异性引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1-2所示；然后使用该引物对凡纳滨对虾不同群体或者群体内个体的基因组DNA进行PCR扩增，对PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶检测；利用产物出现的条带银染显色后进行分析，确定每个个体的基因型，从而获得凡纳滨对虾在fx151遗传标记基因座位的多态性遗传变异图谱。

2.根据权利要求1所述的凡纳滨对虾fx151微卫星DNA标记鉴定fx151遗传变异图谱的方法，其特征在于其PCR反应加样参数为：正反向引物各为0.2 uM, 0.2 mM dNTP, 1*PCR Buffer, 2.0 mM Mg²⁺, 0.6 U Taq酶，50 ng DNA模板，用双蒸水补足到20ul；使用该引物的时设置PCR程序参数为：94℃预变性5分钟；然后94℃变性 30秒，50℃退火1 分钟，72℃延伸 1分钟，重复这个循环35次；之后延伸5 分钟。

3.根据权利要求1所述的凡纳滨对虾fx151微卫星DNA标记鉴定fx151遗传变异图谱的方法，其特征在于对PCR产物的检测：基因组DNA模板进行PCR扩增，其产物在6%-8%聚丙烯酰胺凝胶上电泳，干燥后在扫描保存图片，分析多态性，得到各个个体的基因型，并进一步确定fx151遗传标记基因座位的多态性遗传变异图谱。

4.根据权利要求3所述的凡纳滨对虾fx151微卫星DNA标记鉴定fx151遗传变异图谱的方法，其特征在于在PCR产物的检测中利用长度差异为50 bp的DNA ladder及PBR322 Marker作为电泳的分子量标记。

5.根据权利要求3所述的凡纳滨对虾fx151微卫星DNA标记鉴定fx151遗传变异图谱的方法，其特征在于PCR扩增产物用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染系统进行检测： PCR产物中加上变性Buffer 之后95℃变性5分钟，之后立刻置于冰上降温，使用微量进样器上样5ul，85 W 恒功率电泳至溴酚兰带至胶板的底端，120 分钟后，用质量1‰的硝酸银染色，用30 g NaOH，0.5g四硼酸钠， 8 ml 体积37 % 的甲醛溶解至2 L超纯水的显色液显色，后用超纯水终止显色。